样品稀释

  固体和半固体样品:称取25g样品,放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1:10的样品匀液。 

  液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)或其他无菌容器中充分振摇或置于机械振荡器中振摇,充分混匀,制成1:10的样品匀液。

  本视频使用液体样品为例（注意事项：样品匀液的pH应在6.5~7.5之间，必要时分别用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调节。

  取1:10样品匀液1 mL加入至9 mL生理盐水中，振摇试管使其混合均匀，制成1:100的样品匀液，重复上述操作，可制备1:1000,1:10000…的样品匀液，从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不超过15 min。

初发酵试验

  选择三个适宜的连续稀释度的样品匀液（可选择原液），每个稀释度接种2管LST肉汤，每管接种1 mL（注意：如接种量超过1 mL，使用双料LST肉汤），36℃±1℃，培养24 h±2 h，观察试管内是否有气泡产生，24 h±2 h产气进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48 h±2 h，若产气进行复发酵试验。未产气为大肠菌群阴性。

复发酵试验

  用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，观察产气情况。产气者，记为大肠菌群阳性管。