1、样品制备：

  以无菌操作取待检样 25g或25mL ,加入装有 225mL 营养肉汤的均质袋中,用拍击式均质器均质 1min~2min 。也可选用其它方法进行均质混匀。

2、增菌

  制备的样品匀液于 36℃±1℃ 培养 6h 。取 10 μ L ,接种于 30mL 肠道菌增菌肉汤管内,于42℃±1℃ 培养 18h 。

3、分离

  将增菌液划线接种 MAC 和 EMB 琼脂平板,于 36 ℃±1 ℃ 培养 18h~24h ,观察菌落特征。 在MAC 琼脂平板上,分解乳糖的典型菌落为砖红色至桃红色,不分解乳糖的菌落为无色或淡粉色;在EMB 琼脂平板上,分解乳糖的典型菌落为中心紫黑色带或不带金属光泽,不分解乳糖的菌落为无色或淡粉色。

4、选取平板上可疑菌落 10 个 ~20 个( 10 个以下全选)，在营养琼脂平板上进行纯化后做进一步鉴定。应挑取乳糖发酵,以及乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落，也就是各种类型的菌落都要兼顾挑到，不能顾此失彼，以防漏检。