操作步骤

1.培养基的配制与灭菌：

  按标签说明分别称取单料、双料的海博乳糖胆盐发酵培养基（HB0110-8）加入到蒸馏水中，加热搅拌至充分溶解，冷却后分装试管中，每支试管分装10 mL。每支试管分别放入小倒管，加上塞子，放入灭菌锅，121℃高压灭菌15 min，冷却至室温备用。（如使用我公司即用型产品HBPT023和HBPT022，则无需进行培养基配制，可直接使用。培养基使用前应观察小倒管中是否有气泡，如有应排出小倒管中气泡）

2.初发酵试验：

  手套、移液器、台面消毒，用移液器分别向5支含有10 mL双料乳糖胆盐发酵培养液试管中加入样品10 mL；分别向5支含有10 mL单料乳糖胆盐发酵培养液试管中加入样品1 mL；向1支含有9 mL无菌生理盐水或无菌磷酸盐缓冲液的试管中加入样品1 mL进行稀释，并混匀。最后，分别向5支含有10 mL单料乳糖胆盐发酵培养液试管中加入1：10稀释样品1 mL。轻摇试管（要避免小倒管中产生气泡），使液体充分混合，置36℃±1℃培养箱内培养24 h±1 h。观察每管是否产气，如有气体产生则为初发酵试验阳性，如不产气则为大肠菌群阴性。（视频为演示视频，实际操作应在无菌条件下进行）

3.培养基的配制与灭菌：

  初发酵培养结束后，根据阳性管数量配制适量亮绿乳糖胆盐培养基（HB0125-2），按标签说明分别称取海博亮绿乳糖胆盐培养基（HB0125-2）加入到蒸馏水中，加热搅拌至充分溶解，冷却后分装试管中，每支试管分装10 mL。每支试管分别放入小倒管，加上塞子，放入灭菌锅，115℃高压灭菌20 min，冷却至室温备用。（如使用我公司即用型产品HBPT0125，则无需进行培养基配制，可直接使用。培养基使用前应观察小倒管中是否有气泡，如有应排出小倒管中气泡）

4.确证试验：

  初发酵试验阳性管中培养液充分摇匀后，取一接种环阳性管培养液，接种到10 mL亮绿乳糖胆盐培养液中，注意每完成一次接种需要重新灼烧接种环进行灭菌，接种完成后，置36℃±1℃培养箱中培养48 h±2 h。

  培养结束后观察亮绿乳糖胆盐培养液中小倒管内的产气情况，如有气体产生，就可确定为大肠菌群阳性，记下产气的阳性试管数，查大肠菌群15管发酵法最可能数（MPN）检索表可得出水样中大肠菌群的MPN值；如无气体产生则为大肠菌群阴性。