平板计数琼脂（PCA）

一、PCA使用方法

  1.培养基的制备

  称取4.7gPCA干粉培养基，加入200mL水中，加热煮沸4-5次溶解，转移至锥形瓶，121℃灭菌15分钟后，冷却至46℃-50℃备用。

  2.梯度稀释

  稀释过程参考视频十倍递增系列稀释法，根据预估菌量选择2-3个适宜稀释度（通常菌落总数高的选高稀释度）

  3.接种与倾注平板

  吸取1mL选定稀释度的样液注入无菌平皿（每个稀释度做2-3个平行），将冷却至45-50℃的培养基充分摇匀，摇匀后倾入已加样液的平皿中，倾注量应为15mL-20mL，然后立即旋转平皿，使样液在培养基中分散均匀。待琼脂凝固，再覆盖一层薄琼脂（约4mL），防止菌落蔓延。用1mL无菌生理盐水作对照，重复以上操作。

  4.培养

  待琼脂凝固，翻转平板（防止冷凝水滴落导致菌落蔓延），36±1℃培养48h±2h，水产品30±1℃培养72h±2h。

二、注意事项

  1.配制时充分搅拌溶解琼脂粉，加热煮沸4-5次，可以减少沉淀。

  2.倾注时的温度应保持在46℃~50℃，可防止于48℃±2℃恒温装置中保温，倾注前需充分摇匀，防止琼脂分层。

  3.倾注时倾注量15mL-20mL，培养时平皿堆叠≤6层。

  4.倾注后快速混匀，使样液在培养基中分散均匀。

  5.琼脂凝固，再覆盖一层薄琼脂（约4mL），防止菌落蔓延。

  6.样品稀释至倾注完成需在30分钟内，防止微生物失活。