生化试验

  从MAC、EMB上挑取乳糖发酵、乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落，划线接种到营养琼脂平板进行纯化培养，于36℃±1℃培养18h~24h。挑取纯化培养后的菌落至2mL生理盐水中，震荡均匀，制备成高浓度菌悬液。

  此后，分别取100微升高浓菌液至蛋白胨水、KCN肉汤、KCN对照，取纯培养物“之”字划线且穿刺接种TSI斜面、尿素琼脂，于36℃±1℃培养18h~24h。

  TSI培养结果：不产酸为培养基颜色（橙红），产酸为黄色，产碱为红色，产H2S变黑。

  尿素琼脂培养结果：培养基颜色为橙黄，阳性变红，阴性变黄色。

  蛋白胨水培养结果：滴加靛基质试剂2-3滴，阳性变红，阴性为黄色。

  KCN肉汤培养结果：KCN肉汤及对照培养基均浑浊为阳性结果，肉汤澄清、对照培养基浑浊为阴性结果。

  结果显示为TSI斜面产酸或不产酸，底层产酸，硫化氢阴性。尿素酶阴性和靛基质阳性的培养物为大肠埃希氏菌。

  如果结果为TSI斜面底层不产酸，或硫化氢、KCN肉汤、尿素酶中有任一项为阳性的培养物，均非大肠埃希氏菌。

PCR确认试验

  取生化反应符合大肠埃希氏菌特征的菌落进行后续的PCR确认试验，可进一步确认是否为大肠埃希氏菌。

结果报告

  根据生化试验、PCR确认试验的结果，报告25g（或25mL）样品中检出或未检出某类致泻大肠埃希氏菌，如需报告致泻大肠埃希氏菌的血清型，可选择血清学实验。