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摘 要 进行了大扶康、大蒜素、大蒜油注射液抗深部真菌药效学的研究，采用沙氏培养基倍比稀释法观察不同接菌量、不同培养时间对药物最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)的影响.用1×105 cfu//mL的接菌量，测定了大扶康、大蒜素、大蒜油注射液对65株(临床分离和标准菌株)深部真菌的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90.结果显示大扶康对白色念珠菌、热带念珠菌和新型隐球菌有较好的抑制作用，而对其它真菌无抑制作用和杀灭作用.大蒜素、大蒜油注射液对所有真菌均有抑、杀作用，说明他们具有广谱抑、杀真菌的作用特点.提示：临床在不明确的严重真菌感染时，可联合用药.
Abstract A study on the pharmacodynetics of diflucan,allitridi,and the garlic oil injection against system fungi was carried out.The influence of fungi concentrations and incubation time on minimal inhibitory concentrations(MICs) and minimal bactericidal concentrations(MBCs)was observed by the double dilution method with sabourand agar.MICs and MBCs of them were determined by inoculation 1×105 cfu/mL for 65 species of fungi (clinic and standerd).Diflucan was effective in vitro against Candida albicans,Candida tropicalis and Cryptococcus neoformans while it was no use for other fungi.Allitridi and the garlic oil injection were effective against all these fungi in experiments.It was noted that when the severe infection was not definite it might increase the therapeutic effect with combination of the two drugs.
Key words Diflucan injection；allitridi injection;garlic oil injection;the minimal inhibitory concentration(MIC);the minimal bactericidal concentration(MBC)
近年来，随着抗生素的不断开发和广泛应用，细菌耐药性及院内感染不断上升，真菌发病率大大增加.大扶康、大蒜素、大蒜油注射液是临床普遍使用和受欢迎的抗真菌药，但对深部真菌抑杀效果的广谱性研究不多〔1〕，特别是对青霉菌、申克氏孢子丝菌等MIC、MBC的研究未见报道.本文就3种药物对临床可见6个属的8种65株深部真菌的抑菌、杀菌作用进行了对比实验.
1 实验材料
1.1 菌种
白色念珠菌14珠、热带念株菌10珠、类星形念珠菌4株、新型隐球菌10株、青霉菌10株、毛霉菌4株、烟曲菌3株、申克氏孢子丝菌10株，由南京皮肤病研究所真菌室、沈阳军区总医院检验科提供.
1.2 药物
大蒜素注射液、大蒜油注射液(沈阳军区总医院药剂科)；大扶康注射液9008602(美国辉瑞公司).
1.3 培养基
沙氏琼脂(SDA)培养基：1%蛋白胨、1%葡萄糖、2.2%琼脂、0.5%氯化钠、蒸馏水配制，调整pH为5.0～6.0，高压灭菌后备用.
2 方法与结果
2.1 真菌接种量的确定
用沙氏琼脂培养基将大蒜油注射液倍比稀释为100 μg/mL至3.1 μg/mL 6个浓度，移入平皿中，从每属中随机选取1株，用生理盐水以镜检计数方式配成1×107 cfu/mL、1×106 cfu/mL、1×105 cfu/mL、1×104 cfu/mL 4种浓度的菌悬液，分别接种于含不同药物梯度的沙氏培养基中.另做不含药物的培养基，接种菌悬液，作为生长菌的空白对照.于
2.2 体外培养时间-MIC曲线
将大蒜油注射液倍比稀释为100 μg/mL至3.1 μg/mL 6个浓度，移入平皿和试管，从每属中重新随机选取1株，分别接种105 cfu/mL的菌悬液.同时做不含药物的培养基接种菌悬液，作空白对照.于
体外培养时间-MIC曲线显示：药物的MIC，在温度、接种量相同时，随着培养时间的延长而增大并趋于稳定.为了得到稳定的MIC，热带念珠菌、毛霉菌、烟曲菌至少需培养4 d，新型隐球菌、青霉菌、申克氏孢子丝菌分别需培养5、6、7 d.
Tab.1 The influence of the fungi concentration on MIC(μg/mL)of the garilic oil injection
|
Species |
Fugni concentration/cfu．mL-1 | |||
|
1×107 |
1×106 |
1×105 |
1×104 | |
|
Candida albicans |
12.5 |
6.2 |
6.2 |
3.1 |
|
Cryptococcus neoforman |
50 |
25 |
12.5 |
6.2 |
|
Penicillium |
25 |
12.5 |
12.5 |
3.1 |
|
Mucor |
＞100 |
100 |
100 |
50 |
|
Aspergillus fumigatus |
100 |
50 |
25 |
25 |
|
Sporothrix schenckii |
25 |
12.5 |
6.2 |
3.1 |
2.3 沙氏琼脂培养基法测定MIC
用沙氏琼脂培养基以倍比稀释法将大蒜素、大蒜油、大扶康分别配制成100 μg/mL至0.8 μg/mL的8个浓度的药物梯度，移入平皿和试管中，用生理盐水把各真菌菌株以镜检计数方式配成1×105 cfu/mL的菌悬液，热带念珠菌、新型隐球菌、申克氏孢子丝菌接种于平皿培养基中；青霉菌、毛霉菌接种于试管斜面培养基中.另做不含药物的培养基接种菌悬液，作空白对照.样品于
Tab.2 The MICs(μg/mL) of allitridi,garlic oil and diflucan against pathogenic fungi
|
Species |
Allitridi |
Garilic oil |
Diflucan | ||||||
|
MIC ragen |
MIC50 |
MIC90 |
MIC ragen |
MIC50 |
MIC90 |
MIC ragen |
MIC50 |
MIC90 | |
|
Candida albicans(14) |
3.1～25 |
6.2 |
25 |
3.1～25 |
6.2 |
25 |
0.8～6.2 |
3.1 |
6.2 |
|
Candida tropicalis(10) |
6.2～25 |
12.5 |
25 |
25～50 |
25 |
50 |
25～50 |
25 |
50 |
|
Candida stellatoidea(4) |
25～100 |
/ |
/ |
25～100 |
/ |
/ |
100～＞100 |
/ |
/ |
|
Crytococcus neoformans(10) |
12.5～25 |
25 |
25 |
6.2～50 |
25 |
50 |
6.2～50 |
25 |
50 |
|
Penicillium(10) |
6.2～25 |
12.5 |
25 |
6.2～50 |
25 |
50 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
|
Mucor(4) |
25～50 |
/ |
/ |
25～100 |
/ |
/ |
＞100 |
/ |
/ |
|
Aspergillus fumigatus(3) |
25～100 |
/ |
/ |
25～50 |
/ |
/ |
＞100 |
/ |
/ |
|
Sprothrix schenckii(10) |
6.2～25 |
25 |
25 |
3.1～25 |
25 |
25 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
2.4 沙氏琼脂培养基法测定MBC
以倍比稀释法将大蒜素、大蒜油、大扶康三种药物分别稀释为100 μg/mL至3.1 μg/mL 6个浓度，接种浓度为1×105 cfu/mL的菌悬液，同时做空白对照，置
|
Species |
Allitridi |
Garilic oil |
Diflucan | ||||||
|
MBC ragen |
MBC50 |
MBC90 |
MBC ragen |
MBC50 |
MBC90 |
MBC ragen |
MBC50 |
MBC90 | |
|
Candida albicans(14) |
12.5～50 |
25 |
25 |
12.5～50 |
25 |
50 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
|
Candida tropicalis(10) |
25～100 |
25 |
100 |
25～100 |
50 |
100 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
|
Candids stellatoidea(4) |
50～100 |
/ |
/ |
50～100 |
/ |
/ |
＞100 |
/ |
/ |
|
Crytococcus neoformans(10) |
25～100 |
50 |
100 |
25～100 |
100 |
100 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
|
Penicillium(10) |
25～100 |
50 |
100 |
6.2～100 |
50 |
100 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
|
Mucor(4) |
50～＞100 |
/ |
/ |
50～＞100 |
/ |
/ |
＞100 |
/ |
/ |
|
Aspergillus fumigatus(3) |
50～100 |
/ |
/ |
25～100 |
/ |
/ |
＞100 |
/ |
/ |
|
Sporothrix schenckii(10) |
12.5～50 |
25 |
50 |
6.2～50 |
25 |
50 |
＞100 |
＞100 |
＞100 |
3 讨论 药物的MIC、MBC在培养温度相同时，与接种菌悬液的浓度、培养时间有关，应选择适当的接菌量和达到准确稳定的MIC、MBC观察时间.
大扶康对白色念珠菌有较强的抑制作用，但对临床分离的类星形念珠菌却无作用，说明这种菌株对大扶康不敏感，对热带念珠菌、新型隐球菌也有较好的抑制作用〔2〕，对其他真菌无抑制作用，并且MBC＞100 μg/mL.大扶康是通过影响细胞P450固醇合成酶，破坏真菌细胞膜而抑制真菌的生长.大蒜素、大蒜油对真菌的作用机理虽尚不清楚，但对本试验的65株深部真菌都有不同程度的抑制、杀灭作用，说明他们具有广谱的抑真菌和杀真菌作用，为临床使用大蒜素、大蒜油及制剂提供了依据.大蒜油含有多种有效成分，其中含量较高的为二烯丙基三硫化物( CH2CH —CH2—S—S—S—CH2— CHCH2 )〔5〕，即大蒜素.提示，临床在不明确何种真菌的严重感染情况下，大扶康、大蒜素或大蒜油注射液合用，可发挥药物的各自作用特点，得到较好疗效.
作者：颜鸣 戴华
作者：沈阳军区总医院
参考文献
1 唐整，李荣玲，王端礼，等.5-FC、二性霉素B、大蒜素、中药对烟曲霉的抑菌试验.中皮肤科杂志，1986，19(6)：335～336
2 戴自英.实用抗菌药物学.上海：上海科学技术出版社，1992.252～253
3 郎彝江，张光远.大蒜有效成分的研究.中草药，1981，12(1)：4～5
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