【关键词】  乌梅；金黄色葡萄球菌；表皮葡萄球菌；肠球菌；大肠杆菌；琼脂稀释法

　　Abstract：Objective To observe antibacterial efficiency of Prunus mume Sieb et Zucc against clinical isolates. Method Antibacterial activity of Prunus mume Sieb et Zucc against 308 strains of clinical isolates were determined by agar dilution method. Results MIC50 of Prunus mume Sieb et Zucc against staphylococcus aureus (112 strains), S.epidermidis (112 strains), and Enterococci (28 strains) were 0.72, 1.44, 0.72 mg/mL, and MIC90 were 1.44, 1.44, 0.72 mg/mL respectively. The MIC90 of Prunus mume Sieb et Zucc to Klebsiella pneumoniae and E. coli were 2.88, 1.44 mg/mL respectively. Conclusion Prunus mume Sieb et Zucc has good antibacterial activity against Gram positive cocci and some Gram negative bacilli.

　　Key words：Prunus mume Sieb et Zucc；staphylococcus aureus；S.epidermidis；enterococci；E. coli；agar dilution method

    乌梅抗菌作用有许多报道,1959年山东医学院微生物教研组报道,50%乌梅水煎剂对金黄色葡萄球菌有抑制作用[1]；1960年中国医学科学院药物研究所[2]报道,100%乌梅水煎剂对金黄色葡萄球菌的抗菌作用最强；1960年重庆医学院第一附属医院[3]报道,100%乌梅水煎剂对金黄色葡萄球菌无抑菌作用；赵氏等[4]报道；乌梅对脑膜炎球菌的抑菌环为20 mm；1992年周氏等[5]报道；乌梅对淋球菌的抑菌环为17～26 mm；1993年又报道对小肠结肠炎耶氏菌的抑菌环为≥27 mm[6]。上述报道大多为定性实验,一般使用1株菌株,所使用培养基也多为营养琼脂,所以其结果往往缺乏代表性。为此,我们采用琼脂稀释法,对乌梅进行308株临床菌株的抗菌作用检测。现报道如下。

　　1  实验材料

　　1.1  仪器

　　微量多点接种仪,北京医科大学昆仑药物发展研究所生产。

　　1.2  培养基

　　Mueller-Hinton琼脂(美国BD公司,BBL,简称M-H琼脂)。

　　1.3  药物

　　乌梅购自河北省药材公司。先将乌梅按常法做成煎液,即100 g乌梅文火煎后做成200 mL煎液(为50%乌梅煎液),备用。

　　1.4  菌种

　　从本院临床患者的血液、尿液、脓汁、痰等标本分离的菌株共308株,其中金黄色葡萄球菌112株,表皮葡萄球菌112株,肠球菌28株,肺炎克雷伯菌和大肠杆菌各28株。均按标准予以鉴定[7]。

　　2  实验方法

    采用琼脂稀释法对乌梅进行定量抗菌实验。

　　2.1  药液稀释

　　排列无菌中试管10只,于2～10只管中加无菌蒸馏水10 mL,取50%(1∶2)乌梅水煎液20 mL,于第一管加入10 mL,第2管加入10 mL,于第2管混合后取出10 mL,加入第3管,再混合后取10 mL放入第4管,如此连续稀释至第9管取出10 mL弃掉。第10管只有无菌蒸馏水作对照。这样1～9管中含有不同浓度药液各10 mL。

　　2.2  含药平板制备

　　将已溶化的无菌M-H琼脂900 mL分装于10瓶,每瓶90 mL,将第1管含10 mL 50%的乌梅水煎液放入含90 mL培养基的瓶中,混合后倾注4个平板,每个平板含25 mL含药琼脂,第2管以后的平板制备同第1管,凝固后备用。这样第1组的琼脂平板实际含乌梅5%(1∶20),第2组为1∶40,第3组为1∶80。

　　含药培养基的药物浓度计算：将一定量(50 mL或100 mL)、一定比例(1∶2或1∶4)的原药材水煎液于37 ℃温箱中烘干,称重,求出每1 mL水煎液的实际重量,就可算出每1 mL培养基中水煎药液干重量。如每100 mL 50%乌梅煎液干重为11 500 mg,第1组每100 mL含药培养基含有煎液10 mL,那么每1 mL培养基含煎液干重则为：11500×10＝11.5(mg)

　　所以第1组含药培养基实际含煎剂干重为11.5 mg/mL,因倍量稀释,故第2组含药培养基为第1组数被2除即可。乌梅水煎剂即：1∶20＝11.5 mg/mL,1∶40＝5.75 mg/mL,1∶80＝2.88 mg/mL……。

2.3  菌液制备

    将金黄色葡萄球菌等新鲜培养物(菌落)制成菌液,浓度相当于0.5麦氏比浊管。

　　2.4  指标检测   

　　用多点接种仪分别吸取各种菌液并将其点种于含不同药物浓度琼脂平板上。于35 ℃培养18～24 h,观察最低抑菌浓度(MIC),并统计出MIC50和MIC90的药物浓度和累积抑菌百分率。

　　3  结果   

　　乌梅水煎剂对308株临床菌株抑菌实验结果表明,乌梅不仅对金黄色葡萄球菌等革兰阳性球菌有较好的抑菌作用,对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和肠球菌的MIC90分别为1.44、1.44、0.72 mg/mL；而且对肺炎克雷伯杆菌和大肠杆菌的抑菌结果也很好,其MIC90分别为2.88和1.44 mg/mL(见表1)。乌梅对308株临床菌株的累积抑菌率见表2。表1  乌梅对308株临床菌株的抑菌情况（略）表2  乌梅对308株临床菌株的累积抑菌率（略）

　　4  讨论   

　　乌梅具有敛肺止咳、涩肠止泻等功效,其抗菌作用研究表明对多种细菌有抑制作用。本次研究结果表明,乌梅对308株临床菌株的抑菌效果均较好,不仅对革兰阳性球菌抑菌效果较好,而且对革兰阴性杆菌的抑菌效果也较好,如乌梅水煎剂干重的1.44 mg/mL(1∶160稀释)则使28株大肠杆菌100%受到抑制,这在中药之中较为少见。   

　　许多中药对革兰阳性球菌抑菌效果较好,但是对革兰阴性细菌尤其是带鞭毛的革兰阴性杆菌的抑菌作用较差,而乌梅则具有抑制革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌的广谱抑菌活性。

作者：李仲兴,王秀华,赵建宏,杨敬芳,李继红

【参考文献】

  　　[1] 山东医学院微生物教研组.110中药抗菌谱试验的初步结果[J].山东医学院学报,1959,(8)：42－45.

　　[2] 中国医学科学院药物研究所.545种中药的抗菌作用筛选[J].药学通报,1960,(2)：59－63.

　　[3] 重庆医学院第一附属医院.192种中药及草药抗菌作用研究[J].微生物学报,1960,8(1)：52－58.

　　[4] 赵宗越,何晓青,谢玉昆.26种中药对脑膜炎球菌的抑菌试验[J].微生物学报,1960,8(2)：171－173.

　　[5] 周邦靖,张友菊,张晓玲.148种中药对淋球菌抗菌作用的实验观察[J].浙江中医杂志,1992,27(8)：370.

　　[6] 周邦靖,徐有穗.160种中药对小肠结肠炎氏菌的抗菌作用[J].成都中医学院学报,1993,16(4)：36－37.

　　[7] Murray PR. Manual of clinical microbiology[M]. 8th. Washhington DC：American Society for microbiology,2003.331－333,384－404.