一、实验原理:
用于沙门氏菌的选择性分离培养
月示蛋白胨、牛肉膏提供碳源、氮源、维生素和矿物质;乳糖、蔗糖为可发酵的糖类;十二烷基硫酸钠抑制革兰氏阳性菌;氯化钠维持均衡的渗透压;硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵用于检测硫化氢的产生,使菌落中心呈黑色;琼脂是培养基的凝固剂;溴麝香草酚兰和酸性复红为pH指示剂,发酵糖产酸的菌落呈橙黄色,不发酵糖的菌落为蓝绿色。
二、培养基配方(g/L):
月示蛋白胨 |
12.0 |
牛肉膏 |
3.0 |
氯化钠 |
5.0 |
乳糖 |
12.0 |
蔗糖 |
12.0 |
十二烷基硫酸钠 |
2.0 |
酸性复红 |
0.1 |
溴麝香草酚蓝 |
0.064 |
硫代硫酸钠 |
6.8 |
柠檬酸铁铵 |
0.8 |
琼脂 |
12.0 |
三、操作步骤
使用前,把制备好的平板放置室温10-20分钟。
1、制备质控菌液。
2、目标菌选择合适稀释度的质控菌液0.1ml,均匀涂布于平板上,每一稀释度接种两个平板。
3、非目标菌用1μL接种环取质控菌液1环,将接种环接触容器边缘3次去除多余液体,在平板表面划六条平行直线,同时接种两个平板。
4、36±1℃倒置培养基培养18-24小时,记录实验结果。
接种以下质控菌株,在36±1℃需氧培养18-24小时:
质控菌株 |
菌株编号 |
其他特征 |
鼠伤寒沙门氏菌 |
ATCC14028 |
蓝绿色菌落有黑色中心 |
肠炎沙门氏菌 |
CMCC(B)50760 |
蓝绿色菌落有黑色中心 |
大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
黄色菌落有胆盐沉淀环 |
金黄色葡萄球菌 |
ATCC6238 |
抑制 |
普通变形杆菌 |
ATCC13355 |
黄色菌落有黑色中心 |
图1-2 WS琼脂微生物质控结果
备注:a: 肠炎沙门氏菌,b:鼠伤寒沙门氏菌,c: 大肠埃希氏菌,d;普通变形杆菌,e金黄色葡萄球菌
方法的局限性
本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。
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