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一、实验简介
碳源同化试验和糖类发酵试验是鉴定酵母菌类常用的方法，在碳源充足的条件下，酵母菌会将糖类氧化分解为二氧化碳和水（部分酵母会在无氧环境下特定糖类分解为酒精和二氧化碳）提供能量快速生长，即为糖发酵。而在碳源不足的情况下，一些酵母菌则可以利用糖类合成自身所需的其他营养物质，即为碳源同化。一般来说，真菌能够发酵的糖类物质，也能够同化利用，但是能同化利用的，却不一定能发酵。通过使用碳源短缺的YNB培养基加入相应的糖，然后接种酵母菌进行培养，可通过酵母菌是否能生长判断该酵母菌是否能够同化利用某种糖。
二、YNB成分（g/L）
|
硫酸铵 |
5.0 |
|
L-组氨酸盐酸盐 |
0.01 |
|
DL-蛋氨酸 |
0.02 |
|
DL-色氨酸 |
0.02 |
|
生物素 |
0.000002 |
|
泛酸钙 |
0.0004 |
|
叶酸 |
0.000002 |
|
肌醇 |
0.002 |
|
烟酸 |
0.0004 |
|
对氨基苯甲酸 |
0.0002 |
|
盐酸吡哆醇 |
0.0004 |
|
核黄素 |
0.0002 |
|
盐酸硫胺素 |
0.0004 |
|
硼酸 |
0.0005 |
|
硫酸铜 |
0.00004 |
|
碘化钾 |
0.0001 |
|
氯化铁 |
0.0002 |
|
硫酸锰 |
0.0004 |
|
钼酸钠 |
0.0002 |
|
硫酸锌 |
0.0004 |
|
磷酸二氢钾 |
1.0 |
|
硫酸镁 |
0.5 |
|
氯化钠 |
0.1 |
|
氯化钙 |
0.1 |
|
pH |
5.4±0.2 |
三、实验方法
培养基的配制：称取YNB培养基6.7g，另取5g糖，加入至100mL无菌水中，制成10倍浓度的溶液，用0.22μm滤膜过滤除菌，取0.5mL的10倍浓度溶液，加入至装有4.5mL的无菌水试管中，振荡均匀后使用。
接种及培养：挑取平板上的纯菌落加入至无菌生理盐水中振荡均匀，制成约106-107CFU/mL的菌悬液，吸取50-100μL的菌悬液接种至试管中，25℃培养3-7天，记录生长情况。
注：不同的酵母对不同的糖类同化能力存在差异，有时需持续观察1-4周，能在1周或两周内出现明显浑浊生长，为强同化；在两周内无明显生长，超过两周后迅速生长浑浊，为延滞同化；两周后缓慢变浑浊，为缓慢同化；浑浊程度较低为弱同化；不浑浊为不同化。
四、生长现象及结果观察
接种白色念珠菌至YNB培养基中，25℃需氧培养3-5d。
|
测试菌株 |
菌株编号 |
碳源 |
生长现象 |
|
白色念珠菌 |
CMCC98001 |
葡萄糖 |
阳性，浑浊 |
|
白色念珠菌 |
CMCC98001 |
乳糖 |
阴性，不生长 |
|
白色念珠菌 |
CMCC98001 |
半乳糖 |
阳性，浑浊 |
|
白色念珠菌 |
CMCC98001 |
木糖 |
阳性，浑浊 |
图1 白色念珠菌碳源同化试验（从左至右分别为葡萄糖、乳糖、半乳糖、木糖）
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注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。
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