一、实验原理
用途:用于金黄色葡萄球菌增菌培养,也可用于生产线的无菌模拟灌装。
原理:胰蛋白胨、大豆蛋白胨提供碳氮源、维生素和生长因子;较高含量的氯化钠提供较高的渗透压,抑制大多数非葡萄球菌的微生物;磷酸氢二钾是缓冲剂;丙酮酸钠促进细菌生长;葡萄糖提供碳源。
二、培养基配方(g/L)
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胰蛋白胨 |
17.0 |
|
大豆蛋白胨 |
3.0 |
|
氯化钠 |
100.0 |
|
磷酸氢二钾 |
2.5 |
|
丙酮酸钠 |
10.0 |
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葡萄糖 |
2.5 |
|
pH值7.3±0.2(25℃) |
|
三、试验方法
1. 称取本品135.0g,加热溶解于1000mL蒸馏水中,分装试管,121℃高压灭菌15分钟(或按相关工艺进行过滤除菌),备用。
2. 10倍梯度稀释法制备质控菌株菌悬液,吸取适宜梯度的菌悬液接种于待测培养基(10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤)以及参比培养基(胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)HB0177)。
3. 放置于36℃±1℃需氧培养18-24小时,观察试验结果。
4. 吸取10μL经培养后的目标菌培养液,均匀涂布或螺旋涂布接种到Baird-Parker琼脂平板上,每支试管划1个平板,放置于36℃±1℃需氧培养24-48小时。
5. 吸取10μL经培养后的非目标菌培养液,均匀涂布或螺旋涂布接种到胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)平板上,每支试管接种1个平板,放置于36℃±1℃需氧培养18-24小时,观察试验结果。
四、结果观察
按标签用法制备培养基,接种以下质控菌株,放置于36℃±1℃需氧培养18-24小时。培养结果如图2。
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质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
参比或计数培养基 |
方法 |
质控结果 |
其它特征 |
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金黄色葡萄球菌 |
ATCC 6538 |
10-100 |
TSA |
半定量 |
在Baird-Parker平板>10 CFU |
菌落黑色凸起,周围有一浑浊带,在其外部有透明带 |
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大肠埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
1000-5000 |
TSA |
半定量 |
在TSA平板<100 CFU |
抑制 |
TSA接种量计数结果(大肠埃希氏菌TSA接种量比试管接种小10倍稀释度):
图1 质控菌株在TSA平板中的接种量
10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤培养基:
图2 质控菌株在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤培养基中的生长情况
Baird-Parker平板和TSA平板的质控结果:
图3 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板和大肠杆菌在TSA平板中的质控结果
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注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。


















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