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一、简介
1、冷冻干燥保藏法
冷冻干燥保藏法是一种通过低温脱水与真空保存实现微生物长期存活的菌种保藏方法。1945年由RAPER首次报道用于产孢真菌保存，其原理是将菌悬液快速冷冻后减压脱水，抑制代谢活动以维持遗传稳定性。该方法适用于细菌、酵母、放线菌及病毒等微生物，尤其对脑膜炎球菌等致病菌效果显著，常规保存期可达1年-10年。操作流程包括菌种培养、安瓿管灭菌、低温速冻、真空干燥及密封保存。
2、空肠弯曲杆菌
空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）是一种人畜共患病的病原菌，可以通过不洁食物传播给人。菌体轻度弯曲似逗点状，长1.5 μm～5 μm，宽0.2 μm～0.8 μm。菌体一端或两端有单鞭毛，运动活泼，在暗视野镜下观察似飞蝇。无荚膜，不形成芽胞。微需氧菌，在含2.5%-5%的O2或10%的CO2的环境中生长最好。最适生长温度42℃。该菌抵抗力不强，易被干燥、直射日光及弱消毒剂所杀灭，对低温敏感，室温下(20℃-23℃)很快死亡，在30℃以下不繁殖。空肠弯曲菌是多种动物如牛、羊、狗及禽类的正常寄居菌。
因该菌生长要求比较苛刻，在冻干菌种活化中很容易出现活化失败的情况，现对其活化方法和注意事项提出一些建议。
二、活化操作步骤
1、实验物品准备
菌种、固体培养基（血平板）、液体培养基（弯曲菌增菌液）、接种环、移液枪、无菌移液枪头、酒精灯、镊子、微需氧产气包、培养盒或培养袋。
2、菌种开启与复溶
将西林瓶按铝盖上的箭头方向打开塑盖，撕开铝盖，镊子在酒精灯上灼烧灭菌，待镊子冷却后打开西林瓶胶塞。在复苏液TSB安瓿瓶易折点处（瓶颈上方蓝点）掰开安瓿瓶。用移液枪吸取复苏液加入西林瓶中，用无菌枪头反复吹吸，将冻干粉溶解成为悬液。
3、活化和培养
对于空肠弯曲杆菌等不好培养的微生物建议使用多种方式活化：
（1）直接划线法：接种环蘸取一环菌液在血平板上三区划线。
（2）涂布法：吸取100 µL菌液在血平板上均匀地滴加，然后倾斜使液滴较均匀地铺开，也可以使用接种环将菌液划开。避免使用涂布棒，涂布棒冷却不完全会将细菌烫死，且涂布棒直径较粗，会将部分菌体沾走。
（3）液体接种：吸取100 µL菌液至弯曲菌增菌液中。
将平板和试管、剩余的菌种瓶（塞子微盖上，保证空气的流通）置于培养袋或者培养盒中，加入微需氧产气包，放置于42℃恒温培养箱培养72 h。
4、结果观察
（1）若划线平板上菌株生长良好，可以使用该平板进行菌种保存和使用。
图1 直接划线菌株生长情况
（2）若划线平板上菌株不生长或生长不良，而涂布平板生长良好，可以使用该平板进行菌种保存和使用。
图2 涂布接种菌株生长情况
（3）若划线平板和涂布平板上菌株均不生长，可以使用弯曲菌增菌液和剩余菌液进行划线和涂布血平板，再次培养观察，通常情况下，该方法会有菌株生长。
图3 弯曲菌增菌液生长情况和增菌液在血平板上的生长情况
若该方法仍无菌落生长，可联系我司销售进行售后处理。
三、注意事项：
1、菌株为一次性使用品，开启之后不能反复使用或保存，暂不开启的菌株应在-20℃~-80℃保存。
2、空肠弯曲杆菌为微需氧菌，可提前将培养基放置于微需氧环境除氧。
3、菌种活化用培养基尽量使用营养型培养基，不要使用选择性培养基，如弯曲菌增菌液只添加脱纤维羊血即可，不需要加抗生素。
四、产品展示
我公司有空肠弯曲杆菌菌种和活化、检测相关培养基，客户可根据实际情况和用途进行选用。
表1 产品信息
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产品货号 |
产品名称 |
规格 |
用途 |
添加剂 |
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HB0274-1 |
250 g/瓶 |
用于空肠弯曲菌的分离培养 |
HB0274-1a改良CCD琼脂添加剂 |
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HB0273-1 |
250 g/瓶 |
用于空肠弯曲菌的选择性增菌培养（GB标准） |
HB0237-1a Bolton肉汤添加剂和1001339-1脱纤维羊血 |
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GB124 |
0.4ml*20支/盒 |
用于空肠弯曲菌马尿酸钠水解试验 |
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HB8709 |
10片/瓶 |
用于弯曲菌药敏试验 |
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HB8708 |
10片 |
用于弯曲菌药敏试验 |
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HB8703 |
20片 |
用于空肠弯曲菌吲哚醋酸酯水解试验 |
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HB0273-2 |
250 g/瓶 |
用于空肠弯曲菌选择性增菌培养 |
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HBJZ009 |
250 g/瓶 |
主要用于阳性对照反应和培养基质量控制等实验 |
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HB9287 |
250 g/瓶 |
用于食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的选择性增菌培养（GB4789.9空肠弯曲菌和结肠弯曲菌） |
HB9287a弯曲菌增菌液抑菌剂和1001339-1脱纤维羊血 |
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HBPT001-14 |
1.5ml*50支/盒 |
用于弯曲菌菌种的冷冻保存，也可用于其他常见细菌的保存 |
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HBPT001-15 |
1.8ml*50支/盒 |
用于弯曲菌菌株的运输，也可用于其他常见细菌的运输 |
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HB9352 |
200ml/袋*10 |
用于食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的分离培养（GB4789.9-2025） |
1001339-1脱纤维羊血 |
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HBPM049-1 |
9cm*10 |
用于食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的分离培养（GB4789.9-2025） |
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HBPT9287 |
10ml*20支/盒 |
用于食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的选择性增菌培养 |
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注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。
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