一、双歧杆菌简介

双歧杆菌属（Bifidobacterium）是一种革兰氏阳性、不运动、细胞呈杆状、一端有时呈分叉状、严格厌氧的细菌属，广泛存在于人和动物的消化道、阴道和口腔等生境中。双歧杆菌属的细菌是人和动物肠道菌群的重要组成成员之一。

人体肠道中定植着大量的微生物。肠道微生物与人体健康与疾病之间存在着十分密切的关系。根据所知道的肠道微生物对人体健康的影响，肠道微生物可分为有益、无害和有害三大类。

在正常情况下，人体内的肠道微生物形成了一个相对平衡的状态。一旦平衡受到破坏，如服用抗生素、放疗、化疗、情绪压抑、身体衰弱、缺乏免疫力等，就会导致肠道菌群失去平衡，某些肠道微生物如产气荚膜梭菌等在肠道中过度增殖并产生氨、胺类、硫化氢、粪臭素、吲哚、亚硝酸盐、细菌毒素等有害物质，从而进一步影响机体的健康。

双歧杆菌和乳酸菌等有益细菌则能抑制人体有害细菌的生长，抵抗病原菌的感染，合成人体需要的维生素，促进人体对矿物质的吸收，产生醋酸、丙酸、丁酸和乳酸等有机酸刺激肠道蠕动，促进排便，防止便秘以及抑制肠道腐败作用、净化肠道环境、分解致癌物质、刺激人体免疫系统，从而提高抗病能力等方面有着重要作用。

二、双歧杆菌常用的分离培养基

1、BLB琼脂

（1）检验原理

蛋白胨提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；葡萄糖为可发酵的糖类；L-半胱氨酸为还原剂，辅助培养基维持厌氧环境，有利于厌氧菌的生长；苯胺蓝为酸碱指示剂；肝浸粉为培养各种双歧杆菌提供生长因子；琼脂是培养基的凝固剂；脱纤维羊血是细菌生长繁殖的良好营养物质。

（2）产品配制方法

称取本品40.5 g，加热溶解于1000 mL蒸馏水中，115℃流动蒸汽灭菌30 min，冷至45℃时，加入脱纤维羊血60 mL混匀，倾入无菌平皿，备用。

（3）双歧杆菌在BLB琼脂培养基上，37℃厌氧培养24 h-72 h，为乳白色菌落。

图1 BLB琼脂微生物质控结果

2、BL琼脂培养基

（1）检验原理

蛋白胨、肝浸粉、牛肉浸粉、酵母浸粉、胰酪蛋白胨和大豆胨提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖提供碳源；磷酸氢二钾和磷酸二氢钾做缓冲剂；氯化钠维持均衡的渗透压；硫酸锰、硫酸镁、硫酸亚铁可提供双歧杆菌生长的微量元素；L-半胱氨酸为还原剂，辅助培养基维持厌氧环境，有利于厌氧菌的生长；吐温80可促进双歧杆菌的生长并能中和一些有毒成分；琼脂是培养基的凝固剂。

（2）产品配制方法

称取本品56.23 g，加热搅拌溶解于1000 mL蒸馏水中，分装三角瓶，121℃高压灭菌15 min，倾入无菌平皿，备用。

注：培养基中有少量淀粉、硫酸锰、硫酸亚铁、硫酸镁，灭菌后可能出现少量沉淀，摇匀倒平板即可，不影响使用。

（3）双歧杆菌在BL琼脂培养基上，36℃±1℃厌氧培养48 h-72 h，为白色圆形凸起菌落。

图2 婴儿双歧杆菌在BL琼脂培养基上的菌落特征

3、TPY琼脂培养基

（1）检验原理

水解酪蛋白、大豆胨和酵母浸粉提供碳源、氮源；磷酸氢二钾为缓冲剂；葡萄糖为可发酵糖类；氯化镁、硫酸镁、氯化钙和氯化铁提供微量元素；L-半胱氨酸为还原剂，辅助培养基维持厌氧环境，有利于厌氧菌的生长；吐温80可促进双歧杆菌的生长并能中和一些有毒成分；琼脂是培养基的凝固剂。

（2）产品配制方法

称取本品46.4 g，加热溶解于1000 mL蒸馏水中，分装三角瓶，121℃高压灭菌15 min-20 min，倾入无菌平皿，备用。

注：培养基中有少量氯化镁、硫酸锌、氯化钙，灭菌后有少量沉淀。

（3）双歧杆菌在TPY琼脂培养基上，36℃±1℃厌氧培养48 h-72 h，为乳白色圆形突起菌落。

图3 长双歧杆菌在TPY琼脂培养基上的菌落特征

4、双歧杆菌BS培养基

（1）检验原理

蛋白胨、肝浸粉、牛肉浸粉、酵母浸粉、胰酪蛋白胨为微生物的生长提供氮源、维生素和生长因子；可溶性淀粉、葡萄糖为微生物生长提供碳源；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钾、磷酸二氢钾可调节培养基的酸碱度和离子平衡；FeSO₄•7H₂O、MnSO₄为微生物的生长提供离子；L-半胱氨酸为还原剂，辅助培养基维持厌氧环境，有利于厌氧菌的生长；吐温80可促进双歧杆菌的生长并能中和一些有毒成分；琼脂为培养基的凝固剂。

（2）产品配制方法

称取本品68.9 g，再吸取吐温-80 1 mL，加热溶解于1000 mL蒸馏水中，116℃高压灭菌30 min，冷却至50℃-55℃时，倾入无菌平皿，备用。

注：培养基中有少量淀粉、硫酸亚铁、硫酸锰，灭菌后可能出现少量沉淀，摇匀倒平板即可，不影响使用。

（3）双歧杆菌在双歧杆菌BS培养基上，36℃±1℃厌氧培养24 h-48 h，为乳白色菌落。

图4 质控菌株在双歧杆菌BS培养基平板上的菌落特征

5、双歧杆菌琼脂培养基

（1）检验原理

番茄汁粉简介：优质成熟番茄去皮绞碎，压榨取汁，过滤后经喷雾干燥后制成番茄汁粉。目前，市场上销售的番茄粉由于没有过滤好，含杂质较多，使用时应选取质量优良的番茄汁粉。常用于嗜酸性细菌培养基，尤其对乳酸菌生长发育促进明显。每1000 mL培养基中用量为5 g-10 g。

蛋白胨、酵母浸粉提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；吐温-80、肝浸粉、番茄浸粉和半胱氨酸为培养各种双歧杆菌提供生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。

（2）产品配制方法

称取本品70.0 g，再吸取吐温80 1 mL，加热溶解于1000 mL蒸馏水中，分装三角瓶，121℃高压灭菌15 min-20 min，倾入无菌平皿，备用。

注：培养基中的番茄粉不能完全溶解，灭菌后的沉淀为番茄粉，摇匀倒平板即可，不影响使用。

（3）双歧杆菌在双歧杆菌琼脂培养基上，36℃±1℃厌氧培养48 h-72 h，菌落特征为圆形凸起、奶油色、边缘整齐光滑。

图5 双歧杆菌在双歧杆菌琼脂培养基平板上的菌落特征

6、双歧杆菌培养基

（1）检验原理

胰酪蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母浸粉为微生物的生长提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖为可发酵的糖类；L-半胱氨酸为还原剂，辅助培养基维持厌氧环境，有利于厌氧菌的生长；刃天青为一种氧化还原指示剂，在缺氧或厌氧状态下由粉红变为无色；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、碳酸氢钠为pH缓冲剂；氯化钙、硫酸镁可提供双歧杆菌生长所需的微量元素；琼脂为培养基的凝固剂。

（2）产品配制方法

称取本品46.1 g，加热搅拌溶解于1000 mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15 min，倾入无菌平皿，备用。

注：培养基中含少量氯化钙、硫酸镁，灭菌后可能出现少量沉淀，摇匀倒平板即可，不影响使用。

（3）双歧杆菌在双歧杆菌培养基上，36℃±1℃厌氧培养24 h-48 h，为乳黄色菌落，圆形较小。

图6 双歧杆菌在双歧杆菌培养基平板上的菌落特征

7、莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS琼脂培养基

（1）检验原理

蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉在培养基中作为基础营养物质提供细菌生长所需的氮源、碳源和其他的生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为pH缓冲剂；柠檬酸三铵、醋酸钠、硫酸镁、硫酸锰和吐温80为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌并中和细胞毒性物质，为乳酸菌提供一个良好的生长环境；莫匹罗星锂盐抑制除双歧杆菌外的其他乳酸菌的生长；半胱氨酸盐酸盐具有降低氧化还原电位的作用，防止过氧化物的积累对某些菌产生毒性，有利于厌氧菌的生长；琼脂为培养基的凝固剂。

（2）产品配制方法

称取本品70.15 g，加热煮沸完全溶解于1000 mL蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌15 min，冷至48℃-50℃左右时，每200 mL培养基中加入过滤除菌的莫匹罗星锂盐10 mg和半胱氨酸盐酸盐溶液0.1 g，混匀，倾入无菌平皿，备用。

注：培养基中有少量的硫酸镁和硫酸锰，灭菌后可能出现微量沉淀。因产品含有吐温的原因，高压灭菌后会液体会出现浑浊现象，随着冷却放置后液体变澄清。

添加剂：每瓶需配套添加8盒HB0384-6a莫匹罗星锂盐和2盒HB0384-11a半胱氨酸盐酸盐溶液（冻干粉）使用；

（3）双歧杆菌在莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS琼脂培养基上36℃±1℃需氧培养厌氧72 h±2 h，为圆形凸起边整齐、无色不透明菌落。

图7 质控菌株在莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS琼脂培养基平板上的生长情况

8、TOS培养基

（1）检验原理

蛋白胨、酵母浸粉提供提供细菌生长所需的碳氮源、维生素、微量元素等成分；磷酸氢二钾和磷酸二氢钾为缓冲剂，减弱双歧杆菌产酸导致培养基pH下降的影响；L-半胱氨酸为还原成分，可以帮助维持培养基的厌氧环境，有利于双歧杆菌的生长；丙酸钠是一种常用的食品防腐剂，对多种霉菌、需氧芽孢杆菌、革兰氏阴性菌的生长具有较强的抑制效果；莫匹罗星锂盐则可以抑制多种乳杆菌、乳球菌的生长，低聚半乳糖对于双歧杆菌的生长具有明显的促进作用。

（2）产品配制方法

称取本品62.5 g，加热煮沸完全溶解于1000 mL蒸馏水中，分装三角瓶，每瓶100 mL，115℃±3℃高压灭菌15 min，冷至50℃左右，每100 ml培养基加入过滤除菌莫匹罗星锂盐5 mg，混匀，备用。

（3）双歧杆菌在TOS培养基上，36℃需氧培养厌氧48 h，为乳白色圆形菌落。

图8 双歧杆菌在TOS培养基平板上的菌落特征

三、产品展示

我公司有多种双歧杆菌的培养基，客户可根据实际应用情况和用途进行选用。

表1 部分产品信息

注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。