细菌的单染技术

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细菌的单染技术

2011/12/5 16:02:24 微生物实验

简单染色通常只用一种染色剂，使细菌整个细胞染上颜色。但看不清结构。所以只便于检查细菌的形态、大小和排列方式等。 【实验目的】 1、掌握单染色的操作技术 2、观察细菌的基本形态 【实验原理】 单染色即用单纯的种染料进行染色，多数采用美蓝、结晶紫或石碳酸复红等碱性染料。此法仅能显示细胞的外部形态，而不能辨别其内部结构。染色前必须将细胞固定，其目的是杀死细菌，并使它粘附在载玻片上。此外，还可以增加菌体对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。无论用哪种方法都应尽量使细菌维持原有的形态，防止细胞膨胀或收缩。 【实验材料、药品及器具】 1、菌种大肠杆菌（Escherichia coli） 枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis） 2、染色液石炭酸品红染色或结晶紫染色液（Stining Solutions） 3、无菌水 4、洗瓶装蒸馏水 5、洗净的载玻片（Slicle）5片 6、显微镜、香柏油、接种环、酒精灯、擦镜纸、吸水纸、二甲苯 【实验步骤】 1、涂片：取一片干净无油载玻片，在其中央滴一滴无菌水，然后用接种环以无菌操作方法取少许培养好的大肠杆菌，放在载玻片的水滴中涂匀，注意菌量不宜过多，否则，不易看清单个菌体。 2、固定：将涂好的玻片在空气中风干或火焰上通过3～4 次，使水份蒸发，此时细菌菌体紧贴在玻片上。 3、染色：用石炭酸品红或结晶紫染色剂30~60S，然后用洗瓶轻轻冲洗染色剂（注意不要直接冲洗染色部位），直至无多余的染液，晾干或用吸水纸从旁吸干或用微火烘干。 4、用同样方法将枯草芽孢杆菌制作一张涂片。 5、镜检：首先在低倍镜下找到物像，然后在涂膜中央滴一滴香柏油，换成油浸镜观察两个菌种的形态和排列。 6、去除油镜上的香柏油：先用干净的擦镜纸擦2-3 次，再换另一张擦镜纸蘸取少许二甲苯以除去残留的香柏油，最后用擦镜纸擦干。擦镜头时应顺着镜头直径方向擦，不要沿着圆周方向擦。 【实验结果】 1、绘制观察到大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的形态图，并注明放大倍数。 2、用文字描述两菌株的细胞形态。 【思考题】 1、涂片在染色前为什么要先进行固定？固定时应注意什么问题？ 2、制片为什么要完全干燥后才能用油镜观察？ 3、制片时应注意哪些事项？为什么？