一般培养基制作流程及估计时间
培养皿或试管清洗,烘乾:
以清水或洗洁剂以容器清洗乾净,再以烘箱烘乾,若时间充裕,亦可以自然晾乾.一般30个培养皿清洗约需15~30分钟,烘乾约需半小时至一小时.
棉花塞制作(使用培养皿者此步骤省略):
取适量棉花揉成团大小适合试管口,长度需达管口直径两倍以上,再以纱布包好.时间难以计算,一个大致可以1分钟计算.
培养皿或试管灭菌:
将培养皿或试管放入160℃以上烘箱2小时以上加以灭菌.等升温约需半小时,灭菌完后,需降至80℃以下方可拿出,降温时间约为1~2小时,降温速度不可过快,避免玻璃破裂.
培养液配置:
依培养基配方配置溶液,一般一盆培养皿或一管试管,约需10~15ml溶液.
总量少时,为避免水分过度蒸发或沾黏於灭菌容器上,需斟酌加量.
此步骤时间,仅与秤药技术有关,粉末放入水中,只要稍微摇散,不要有结块现象即可.
以高压灭菌釜将培养液灭菌:
将配好之溶液置入高压灭菌釜灭菌,以121℃,1.2kg/cm2 放置20~30分钟左右即可.自开机起至压力降至0约需1小时以上.
培养液倒入容器:
灭菌完毕,尚不能直接倒入容器,一方面高温时,我们很难以手拿著操作,一方面怕试管或培养皿在快速温度变化时会破裂.一般约等到40~50℃才将培养液倒入我们所需的容器,最好能在10分钟内全部倒好.倒入后培养皿很快即会凝固,但试管需等待久一点.
冷却固化后,进行实验或放入冰箱暂存:
培养皿培养基需倒置,以避免凝结之水气污染.
试管培养基则塞好棉花塞保存,必要时以铝箔纸包裹.
实验:
操作前半小时需先以70%酒精擦拭无菌操作台内部,然后开启送风开关,此时可同时以紫外光灯加强灭菌,但请放置告示牌,避免伤及他人.
【培养基成分】本室目前备有LB固态培养基及LB液态培养基粉末成分如下:
1.LB固态培养基:
Tryptose 10g/L,Yeast Extract 5g/L,Sodium Chloride 10g/L,Agar 15g/L
2.LB液态培养基:
Tryptose 10g/L,Yeast Extract 5g/L,Sodium Chloride 10g/L