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一、试验用途及原理：
用于沙门氏菌和志贺氏菌、霍乱弧菌生化鉴定。
细菌分解乳糖依靠两种酶的作用，一种是β-半乳糖苷酶渗透酶，它位于细胞膜上，可送乳糖分子渗入细胞，另一种β-半乳糖苷酶，亦称乳糖酶，位于细胞内，能使乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。
具有上述两种酶的细菌，能在24-48h发酵乳糖，而缺乏此两种酶的细菌，不能分解乳糖。乳糖迟缓发酵菌只有β-半乳糖苷酶而缺乏β-半乳糖苷渗透酶，因而乳糖进入细胞很慢，需经培养基中1%乳糖较长时间的诱导，产生相当数量的渗透酶后，才能较快分解乳糖，故呈迟缓发酵现象。
ONPG可迅速进入细菌细胞，被β-半乳糖苷酶水解，释放出黄色的临位硝基苯酚，故由培养液变黄可迅速测知β-半乳糖苷酶的存在，从而确定该菌为乳糖迟缓发酵菌。
二、培养基配方（g/L）：
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1%蛋白胨水 |
750mL |
|
ONPG |
1.5g |
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磷酸盐缓冲液 |
250mL |
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pH 7.5 25℃ |
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三、试验方法：
1. 将标准储备菌株接种到非选择性肉汤中或采用其他制备方法，制成5 McFarland浊度（约109CFU/ml）的菌悬液。
2. 吸取0.05-0.08ml（约1-2滴）至生化管内，36±1℃培养24h后，观察实验结果。
四、结果观察与解释
接种以下质控菌株，36±1℃培养24h：
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质控菌株 |
菌株编号 |
生长情况 |
其他特征 |
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大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
+++ |
阳性，培养基变深黄色 |
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霍乱弧菌 |
/ |
+++ |
阳性，培养基变深黄色 |
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福氏志贺氏菌 |
CMCC(B)51572 |
+++ |
阴性，培养基无色 |
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宋内志贺氏菌 |
CMCC51592 |
+++ |
阳性，培养基变深黄色 |
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痢疾志贺氏菌 |
CMCC51252 |
+++ |
阴性，培养基无色 |
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肺炎克雷伯氏菌 |
CMCC46117 |
+++ |
阳性，培养基变深黄色 |
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伤寒沙门氏菌 |
CMCC(B)50071 |
+++ |
阴性，培养基无色 |
图1-1 ONPG生化管质控结果
五、注意事项
本培养基仅为细菌鉴定的一部分，需做其他补充试验。
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