必须按《中国药典》抗生素微生物检定法中的三剂量法要求对工作标准品进行效价复核实验。每次实验均应称取2份国家标准品和2份需测工作标准品进行平行试验，每组实验应不少于9个平皿，实验结果的可信限率应不得大于5%，结果取平均值。该实验需反复多次地在不同操作人员间进行，以积累充分多的数据满足统计需要。最后，将所得结果进行统计合并计算（不是求平均值，具体方法可参见《中国药典》生物检定统计法中的实验结果的合并计算），才能得出被测工作标准品较为客观的效价。各实验室自行标定的工作标准品只能在本室内使用。 
    复核试验应由具有一定实验操作经验的人员进行。根据所要分析的抗生素类型，来确定采用管碟法还是采用比浊分析法。本文以管碟法为例，介绍工作标准品的复核和评价方法。 
    按《中国药典》（2005年版 ）要求，用标准贮备液稀释制备3种不同浓度的标准液，如80%、100%和125%。这3种浓度的对数值间是等距离的，因此在检测结果的统计学计算中可采用一常数表示。国家标准品的浓度分别用U1、U2和U3表示低、中、高3种浓度。 
   本法采用随机编码方式，在平皿内的琼脂培养基表面摆放6个不锈钢小管，向每个管内加入不同浓度的溶液。每个工作标准品的称量样品要求做12个平皿。在规定条件下培养，培养时间结束后，目测检查每个平皿，看是否抑菌区不正常或不含抑菌区的平皿，并剔除不正常的平皿，从目测结果良好的平皿中随机选取其中的9个，用适当的仪器（如ZY-300W多功能微生物 自动测量分析仪）准确量出每个抑菌圈的直径。 
    无论是在进行抗生素效价复核还是平时进行效价的正式测定操作之前，都应先进行菌液浓度的预测试验。其目的是选择适宜的菌液浓度，使被测抗生素标准品溶液所致的抑菌直径在《中国药典》（2005年版 ）规定范围内，2.2法标准 品溶液高浓度所致的抑菌圈直径在18—24mm；3.3法标准品溶液中心浓度所致的抑菌圈直径在15—18mm。 
    其操作方法是：①按无菌操作往双碟内加入加热融化后的底层培养基20ml，用陶瓦盖覆盖，待其凝固；②取加热融化后的菌层培养基20ml，待其降至规定温度将试验菌加入培养基内，摇匀，吸取5ml均匀摊布在底层培养基上，用陶瓦盖覆盖，静置约10—20min；③在制备好的双碟上等距离放置小钢管2—3个，在小钢管内滴加欲测抗生素的标准溶液；④滴加完毕，用陶瓦覆盖，小心移置培养箱内，按规定的温度和时间进行培养；⑤取出培养好的双碟，用卡尺测量抑菌圈直径。若所试抑菌圈直径超过规定范围，可调整加菌量或调整抗生素标准品溶液的浓度，重新测试 。