1  主题内容与适用范围  
     本标准规定了各类粮食、食品和饮料霉菌和酵母菌计数的检验方法。  
     本标准适用于各类粮食、食品和饮料中霉菌和酵母菌的计数。  
2  引用标准  
    GB 4789.28  食品卫生微生物学检验  染色法、培养基和试剂  
3  设备和材料  
3．1  温箱：25～28℃。  
3．2  振荡器。  
3．3  平天。  
3．4  显微镜。  
3．5  玻塞三角瓶：300 mL。  
3．6  试管：15 mm×150 mm。  
3．7  平皿：直径9 cm。  
3．8  吸管：1 mL及 10 mL。  
3．9  酒精灯。  
3．10  载物玻片。  
3．11  盖玻片。  
3．12  广口瓶。  
3．13  牛皮纸袋：121℃灭菌20 min。  
3．14  金属勺、刀等。  
3．15  试管架。  
3．16  接种针。  
3．17  橡皮乳头。  
4  培养基和试剂  
4．1  马铃薯-葡萄糖琼脂培养基，附加抗菌素，按GB 4789.28 中4.79 规定。  
4．2  孟加拉红培养基：按GB 4789.28 中4.81 规定。  
4．3  高盐察氏培养基：按GB 4789.28 中4.78 规定。  
4．4  灭菌蒸馏水。  
4．5  乙醇。  
5  检验程序  
检验程序如下：     
6  操作步骤  
6．1  采样：取样时须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好 
灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或广口瓶，金属刀或勺等。在卫生学调查 
基础上，采取有代表性的样品。样品采集后应尽快检验，否则应将样品放在低温 
干燥处。  
    粮食（包括粮库贮粮，粮店或家庭小量存粮）样品的采集，可根据粮囤或粮 
垛的大小和类型，分层定点取样，一般可分三层五点，或分层随机采取不同点的 
样品，充分混合后，取500 g左右送检。小量存粮可使用金属小勺采取上、中、 
下各部位的混合样品。  
    海运进口粮的采样：每一船仓采取表层、上层、中层及下层四个样品，每层 
从五点取样混合，如船仓盛粮超过 10000 t，则应加采一个样品。必要时采取有 
疑问的样品送检。  
    谷物加工制品（包括熟饭、糕点、面包等）、发酵食品、乳及乳制品以及其 
他液体食品，用灭菌工具采集可疑霉变食品 250 g，装入灭菌容器内送检。  
6．2  以无菌操作称取检样 25 g（或 25 mL），放入含有225 mL灭菌水的玻塞三 
角瓶中，振摇 30 min，即为 1：10 稀释液。  
6．3  用灭菌吸管吸取1：10稀释液 10 mL，注入试管中，另用带橡皮乳头的1 mL 
灭菌吸管反复吹吸 50 次，使霉菌孢子充分散开。  
6．4  取1 mL1：10稀释液注入含有 9 mL灭菌水的试管中，另换一支 1 mL灭菌 
吸管吹吸 5 次，此液为 1：100 稀释液。  
6．5  按上述操作顺序做10倍递增稀释液，再稀释一次，换用一支1 mL灭菌吸 
管，根据对样品污染情况的估计，选择 3 个合适的稀释度，分别在做 10 倍稀释 
的同时，吸取 1 mL 稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做 2 个平皿，然后将凉至 
45℃左右的培养基注入平皿中，待琼脂凝固后，倒置于 25～28℃温箱中，3 d 
后开始观察，共培养观察 5 d。  
6．6  计算方法：通常选择菌落数在10～150之间的平皿进行计数，同稀释度的 
2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克 （或毫升）检样中所含霉菌和酵 
母数。  
6．7  报告：每克（或毫升）食品所含霉菌和酵母数以个/g（个/mL）表示。