先将病毒悬液对缓冲液透析。根据病毒的种类不同，选择适当的缓冲液，但离子强度不能超过03mol/L以上。病毒粒子依据其所携带的电荷，在电场中或向正极，或向负极移动，因此电泳结束后，分段收集病毒区带部分，就能达到提纯的目的。 Polson设计了特殊的U形电泳管，进行了脊髓灰质炎病毒的大量精制。本法包括密度梯度电泳和pH梯度电泳等，后者又称为等电聚焦电泳。[HT5”SS][JZ]图13-1〓Polson]U形电泳管[JZ]A,B电极槽；C电泳管；D侧管；E毛细漏斗；FU形侧管；G节门活塞]。[HT5SS] 图中C为梯度柱即电泳管，容积为110～220ml，外面为冷凝套管，必]要时可用流水冷却。梯度溶液经常用0～40%蔗糖作为梯度介质。A和B为电极槽，D为侧管，E]为毛细漏斗，F为U形管另一侧，装入缓冲液，G为节门活塞。 从毛细管E小心注入缓冲液配制的蔗糖浓度梯度溶液(此时活塞G开放)，密度低者在上，密度高者在下。于两侧电极槽中只加入缓冲液。然后将浓缩的病毒样品悬浮于40%蔗糖溶液中，或向病毒悬液中加入固体蔗糖，使样品中最终含蔗糖浓度约为37%，并在样品中加入适量酚红作指示剂。此后用注射器通过胶管从毛细管E注入2ml样品，于注入口附近形成样品带。加完样品后通电，依据病毒粒子所携带的电荷而在电泳管内移动。电泳完毕后由侧管D分段取样，测定各管中蛋白含量和病毒滴度或抗1＊ヒ话愕牡缬痉ê苌儆糜诖罅恐票福蛭缬竞芤资共《镜鞍酌鸹睿梅椒ㄖ饕τ糜诓《镜鞍椎姆治鲇爰āＳτ米疃嗟氖荢DS聚丙烯酰胺凝胶电泳法。7泳法。
文章详情
