（一）水

制备培养基必须使用纯净的，无微量金属，杀菌性和抑菌性化学物质的蒸馏水。注意，以加氯的水进行蒸馏所得的蒸馏水，即使在使用前通过离子交换树脂，也偶含有显著量的游离氯．所以应进行测试，如正联甲苯胺试验显色。测试后，以硫代硫酸钠中和后或进行重复蒸馏后才能使用。

（二）琼脂

琼脂俗称洋菜，英文名agar ，为由海藻类（主要足石花菜）提取出来的一种胶体多糖，即半乳聚糖水解后，产生半乳糖及少量五烷糖和有机硫。其化学性质系为一种不带侧链的半乳聚糖甙，含有90%右旋半乳糖和10％左旋半乳糖。在约每10个吡喃半乳糖单位有一个首位或次位的羟基被硫酸脂化。其阴离子脂组（-SO₂ -OH ）主要是与钙结合，但也有少数是和镁、钠、或钾结合。

其制造方法，一般是在每年7-9 月收集海中石花菜，洗涤并经晒干后保存。于冬季冰冻开始时，按1：30 比例将干藻放入水中煮沸，然后加入硫酸少许并煮沸5-6 小时。过滤后待冷，用“漏子”推成粗条，再经日晒夜冻2-3 周后，即成条状琼脂。

除少数菌种外，绝大多数细菌都不能分解琼脂，因而琼脂在培养某中无营养价值，只是在液体培养基中凝结成半固体或固体培养基而已。

国外商售琼脂一般比较纯净，国内琼脂则含有杂质较多，故在使用前应先用冷水浸泡洗涤后才能使用。

供细菌培养使用的品质优良的琼脂应具有下列特性：

( l ）凝固点不超过2 ℃ ，通常范围在34～38 ℃ 。

( 2 )1L 的1.5%琼脂，在蒸汽浴中重新完全溶化，不超过45 分钟。

( 3 ）在98 ℃ 能完全溶解子水。

( 4 ）在45 ℃ 仍保待足够的液态，以利于试验时的混合均匀。

( 5 ）与水的结合水平至少在50%以上，以保证完全的溶解性。

（6）含水量不超过原重17%。

( 7 ）燃烧残余物不超过3 %。

（8）金属最高允许含量，铅0.0005%，铁0.001%，镁0.1%，钙0.2%，钠0.4%，并不得含有抗菌物质。

( 9 ）透明度：在蒸馏水中加热溶解后，呈微乳白色透明凝块。无混浊沉淀及微粒。

( 10 ）凝胶强度：即在1.5%琼脂平板1cm² 表面上于20秒钟内使其破坏的最小重量(g)。优良琼脂应在300-400克。

在实际应用中，一般均将琼脂做成按0.5%的差距，递增至3%的生理盐水琼脂平板，然后用接种环或接种针试行划线涂布，以决定该批琼脂实际使用的浓度。