原理：某些细菌能从葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇（Acetymethyl carbinol）→2，3-丁烯二醇（2，3-bytaylene cylycol），在有碱存在时氧化成二乙酰，后者和胨中的胍基化合物起作用，产生粉红色的化合物。
   培养基：含葡萄糖、K2HPO4、蛋白胨各5g，完全溶解于1000ml水中后，分装试管内，间歇灭菌或10磅10分钟灭菌。
   方法：
1．O’Meara’s法
   试剂：40g氢氧化钾溶于100ml蒸馏水中，加入0.3g肌酐即成。
   将被检细菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养后，于35～37℃培养48小时，于每毫升培养物中加入0.1ml，猛烈摇振混合。
2．Baritt’s法
   试剂：6％α-奈酚酒精溶液为甲液，40％氢氧化钾为乙液。
   同上法接种培养细菌，于2ml培养液内加入甲液1ml和乙液0.4毫升，摇振混合。
 
   试验时强阳性者约于5分钟后，可产生粉红色反应（长时间无反应，置室温过夜），次日不变者为阴性。