GB 14963—2011
附录A
嗜渗酵母计数
A.1 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
A.2 培养基和试剂
A.2.1 30%葡萄糖溶液(pH 6.5±0.5)
无水葡萄糖 30.0g
蒸馏水 100mL
称量适量葡萄糖,溶解在蒸馏水中,必要时调节 pH 为 6.4左右。分装后,115℃高压灭菌 20min。
酪蛋白胨 5.0g
无水葡萄糖 10.0 g
磷酸二氢钾 1.0g
硫酸镁(MgSO4·H2O) 0.5g
氯硝胺 0.002g
无水甘油 200g
琼脂 15g
氯霉素 0.1g
蒸馏水 1000mL
除氯霉素外,将全部成分加热煮沸至完全溶解,如有必要,调节 pH 为 6.4左右。加入抗菌素,121 ℃高压灭菌 15 min,最终的 pH 应为 5.6±0.2。灭菌后,立即在 44 ℃~47℃水浴冷却至 50 ℃以下,在每个灭菌平皿中倾注大约 15 mL~20mL 培养基,放置在水平的台面上冷却固化备用。如有必要,可以放在 36℃培养箱中过夜,使琼脂表面干燥无水珠。避光保存。
A.3 检验程序
A.4 操作步骤
样品采集后,应尽可能及时检验。若不能及时检验,普通样品应置 2℃~5℃冰箱保存,在 24h 内检验。冷冻样品应在 45℃以下不超过 15min 或在 2 ℃~5 ℃不超过 18 h解冻。
以无菌操作在天平上称取固体或液体检样 25 g,加入 30%葡萄糖稀释液 225g,用旋转刀片式均质器以 8000 r/min 均质 1min,或拍击式均质器拍击 2 min,制备成 1:10 的均匀稀释液。如无均质器,则将样品放入加有玻璃珠的无菌锥形瓶中,并充分振荡。
用灭菌吸管吸取 1:10 稀释液 1mL,注入含有 9mL 30%葡萄糖稀释液的试管内,置于漩涡混悬仪上混匀,制备 1:100的稀释液。另取 1mL 灭菌吸管,按前操作依次制备 10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1 支 1 mL 灭菌吸管。
参照GB 4789.2的报告方式,以 CFU/g 为单位报告样品中嗜渗酵母的数量。
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