核酸分子杂交法

(1) 耐热直接溶血素基因(tdh)探针:1992 年 ,Lee 等 建立了1 种检测副溶血性弧菌 tdh 的基因探针方法 ,试验结果表明 ,该探针可特异地与 89 株副溶血性弧菌分离株的DNA杂交 ,对其他弧菌或其他肠道、非肠道菌(n =48) 不反应。利用该探针可直接检测人工染菌的食品 ,无需进行增菌分离。

(2) 耐热直接溶血素相关毒素基因(trh) 探针:2006年 ,Raghunath 等 用碱性磷酸酶标记的针对trh的寡聚核苷酸探针 ,检测海产品中 trh⁺ 的副溶血性弧菌。结果表明 ,trh探针的特异性为 100%、灵敏度为 (510 ×10 ～314 ×10 cfu/g),反应时间为 1h,该探针可特异、灵敏地检测海产品中 trh⁺ 的副溶血性弧菌。

(3) 不耐热溶血素基因( tlh ) 探针:McCarthy 等应用碱性磷酸酶(AP)标记的基因探针检测副溶血性弧菌的tlh。在124 株试验株中 ,AP标记的探针仅对26 株副溶血性弧菌杂交 ,而对 88 株其他弧菌和 l0 株非弧菌细菌均不杂交 ,应用该探针和API20E鉴定系统检测了从牡蛎中分离的 206 株疑似副溶血性弧菌 ,两者检测结果97%相同。