PCR方法

    1999 年 ,Yamaichi 等 已经完成副溶血性弧菌的基因组测序 ,VP的毒力基因序列得到进一步确定。针对致病性副溶血性弧菌的较好PCR检测方法有多重 PCR 技术和荧光定量 PCR 技术。

    （1）多重 PCR技术:Bej 等 根据副溶血性弧菌编码不耐热溶血素的 tlh 基因、耐热直接溶血素的tdh基因和相对耐热直接溶血素的 trh 基因设计引物 ,利用多重 PCR检测 111 份样品中的副溶血性弧菌 ,其敏感性高、特异性强 ,而且能区分产毒株和非产毒株 ,远优于传统细菌学方法。吴彩云等 建立了1 种双重 PCR 方法 ,该方法可同时检测携带有tl 和tdh基因的副溶血弧菌毒力菌株。结果表明 ,该法不但具有常规 PCR的优点 ,而且还能节省耗材和时间 ,可用于检测水产食品以及临床样品中的副溶血弧菌的毒力菌株。

    （2）荧光定量 PCR技术:Blackstone 等 建立了1 种基于 TaqMan探针的快速定量检测含tdh的副溶血性弧菌的实时 PCR方法 ,特异性检测致病性副溶血性弧菌 ,该试验的 DNA 灵敏度为 lCFU/PCR 体系 ,试验快速、准确 ,整个反应 1h 内就可完成。该方法具有特异性、敏感性及精确性高的优点 ,同时避免了 PCR后续步骤 ,减少了产物污染的机会。