培养基：三丁酸甘油酯琼脂培养基，是在酵母浸膏琼脂中加入三丁酸甘油酯制成， pH为7,5三丁酸甘油酯加入后，会发生乳化作用，因此，制作时最好用电动混合器或电 动搅拌器作为搅拌工具。连续3d蒸汽灭菌，每次30min。培养基可铺成平板使用，先将 酵母浸膏琼腊培养基铺成平板，再将5mL熔化的二丁酸甘油酯琼脂培养基覆盖在酵母浸 膏琼I旨上。也可以使用市售的配制好的培养基。

平板划线接种,横穿表面划线一次，在最佳生长温度培养2~14dc 结果记录：三丁酸甘油酯水解使培养基变得透明，井形成一个清晰环带，以毫米为单 位记录下从菌落边缘到清晰环带边缘的宽度。该反应通常被认为是脂肪酶的典型反应， 但sierra(1964)曾报道，虽然三丁酸甘油酯不是结构复杂的脂肪，细菌的蛋白水解酶也能 将其水解。