MH琼脂的原理和使用方法

张辉

2018-6-14 8:33:44 青岛海博生物

一、试验原理：

本培养基主要用于用于琼脂纸片扩散法（kirby-baner纸片扩散法）测定细菌对抗生素敏感性。牛肉粉和酸水解酪蛋白提供氮源、维生素和氨基酸；可溶性淀粉吸收有毒的代谢产物；琼脂是培养基的凝固剂。

二、培养基配方（g/L）：

牛肉粉	6.0
可溶性淀粉	1.5
酸水解酪蛋白	17.5
琼脂	17.0
pH 7.3±0.1 25℃

三、试验方法：

1.平板的制备与保存

称取Mueller-Hinton琼脂42.0g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，倾注培养基到无菌平皿中，使之在平皿中形成一个厚度为4-5 mm的琼脂层。倾注后将平板放到水平平面，使琼脂冷却凝固。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和（或）5 ℃±3 ℃冰箱的密封袋中，在有效期内使用。使用前应可将平板置35 ℃温箱中或置室温层流橱中对琼脂表面进行干燥，培养基表面应湿润，但不能有水滴，培养皿也不应有水滴。

2. 质控菌株的复苏

将质控菌株接种到TSA平板上，按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。检查纯度合格后，用于质控工作菌悬液的制备。

3. 质控菌工作菌悬液的制备

将纯度满意的质控菌株培养物悬浮于TSB肉汤中，并调整浊度为0.5麦氏标准（约1×10⁸ CFU/mL～2×10⁸ CFU/mL）。

4. 接种

用涂布法将质控工作菌悬液接种于MH平板上，并贴上相应的抗生素纸片（每平板最多贴6片），将平板翻转后按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。调整菌悬液浊度与接种所有平板间的时间间隔不要超过15 min。

四、结果观察与解释

接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养18-24小时。在无反射黑色背景下，观察有无抑菌环。

MH琼脂质控参考标准

抗生素名称	纸片抗生素 (mg)	抑菌圈（mm）
抗生素名称	纸片抗生素 (mg)	大肠埃希菌 ATCC 25922	铜绿假单胞菌 ATCC 27853	金黄色葡萄球菌 ATCC 25923	粪肠球菌 ATCC 29212
庆大霉素	10	19-26	16-21	19-27
羟苄青霉素	100	23-29	18-24	-
四环素	30	18-25	-	24-30
多黏菌素B	300IU	12-16	11-16	-
氯霉素	30	21-27	-	19-26
TMP-SMZ	1.25/23.75	24-32	-	24-32	≥20
头孢哌酮	75	28-34	23-29	24-33