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半固体培养基的使用方法及质控结果
 许英俊
2020-10-30 10:41:17 青岛海博生物

一、培养基用途


 用于动力观察,菌种保存,H抗原位相变异试验等。  


二、培养基基础成分(g/L)


蛋白胨

10.0

牛肉浸粉

3.0

琼脂

4.0

氯化钠

5.0

pH值7.4±0.1

25℃


三、试验原理


 蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、矿物质;氯化钠维持均衡的渗透压;较少量的琼脂作为培养基的凝固剂。


四、培养基用法


 称取本品22.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,煮沸溶解,分装小试管,121℃高压灭菌15分钟,直立凝固,备用。

 此溶液相当于多价鞭毛抗原(H)鉴定中,0.3%~0.4%半固体琼脂的小玻管中的溶液。

 如需配置0.55%~0.65%半固体琼脂平板,需在每1000ml溶液中添加1.5~2.5g琼脂即可。


五、质控


 (1)制备好的培养基,穿刺接种以下质控菌株,放置36±1℃需氧培养24-48小时。质控标准如下:


质控菌株

菌株编号

接种量(CFU)

参比或计数培养基

方法

质控结果

其他特征

大肠埃希氏菌

ATCC25922

>5000

/

定性

阳性,扩散生长

/

蜡样芽胞杆菌

CMCC(B)63303

>5000

//

定性

阳性,扩散生长

//

福氏志贺氏菌

ATCC12022

>5000

/

定性

阴性,沿穿刺线生长


宋内氏志贺氏菌

ATCC25931

>5000

/

定性

阴性,沿穿刺线生长

/


 (2)质控菌株在该培养基中培养试验结果如下图:质控阳性菌除了在穿刺接种的穿刺线上生长外,在穿刺线的两侧均可见羽毛状或云雾状浑浊生长;质控阴性菌只沿穿刺线呈明显的线状生长。




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