阪崎肠杆菌显色培养基（DFI琼脂）原理及使用方法

李令梅

2021-8-24 14:17:20 青岛海博生物

一、培养基用途及原理：
用于婴儿配方奶粉和其它食品中阪崎肠杆菌的快速检测。

阪崎肠杆菌显色培养基是青岛海博生物公司根据GB4789.40生产的培养基，胰蛋白胨、大豆蛋白胨提供营养，氯化钠维持渗透压，琼脂为凝固剂，脱氧胆酸钠主要抑制革兰氏阳性菌的生长，柠檬酸铁铵、硫代硫酸钠可使产硫化氢的非目标菌呈黑色中心，阪崎肠杆菌可特异性分解底物5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃葡糖甙使菌落显蓝—绿色，其它不产硫化氢、不分解底物的菌一般显无色或黄色。

二、培养基配方（g/L）：

胰蛋白胨	15.0
大豆蛋白胨	5.0
氯化钠	5.0
柠檬酸铁铵	1.0
硫代硫酸钠	1.0
脱氧胆酸钠	1.0
5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃葡糖甙	0.1
琼脂	15.0
pH 7.3±0.2 25℃

三、试验方法：
1. 称取本品8.62g加入200ml蒸馏水，加热煮沸完全溶解，121℃高压灭菌15min，冷至50℃左右时，倾入无菌平皿。制备好的平板保存于2-8℃，应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处，室温保存。
2. 使用前，把制备好的平板放置室温10-20分钟。
3. 制备质控菌液。
4. 选择合适稀释度的目标菌质控菌液0.1ml，均匀涂布于平板及参比平板上，每一稀释度每种接种两个平板。
5．用1μL接种环取非目标菌质控菌液1环，将接种环接触容器边缘3次去除多余液体，在平板表面划六条平行直线，同时接种两个平板。
6. 36±1℃倒置培养基培养18-24小时，记录实验结果。

四、结果观察与解释：

接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养18-24小时。

质控菌株	菌株编号	接种量 (CFU)	参比或计数培养基	方法	质控评定标准	其他特征
阪崎肠杆菌	ATCC29004	20-200	TSA	定量	PR≥0.5	蓝绿色菌落
金黄色葡萄球菌	ATCC25923	/	/	半定量	G≤1	/
大肠埃希氏菌	ATCC25922	/			/	黄色菌落
伤寒沙门氏菌	ATCC14028	/	/	定性	/	无色菌落，有黑色中心
肺炎克雷伯氏菌	ATCC10031	/			/	无色菌落