一、简述

  对于样品中的微生物计数测定，通常采用两种方法，涂布法和倾注法。“涂布”最初是一个工业用语，是为了防腐、绝缘、装饰等目的，以液体或粉末形式在织物，纸张，金属箔或板等物体表面上涂盖薄层的操作。

  在微生物计数接种时，借鉴了这种说法，简单说就是将含有微生物的样品液，滴加于培养基平板上，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂抹，让菌液均匀扩散分布，培养后就可长出单个的微生物的菌落。具体操作方法可参考：涂布平板法。

  对于涂布的工具——涂布棒，目前市面上有各种涂布棒，从材质上看有不锈钢的、玻璃的、塑料的，从形状上分有三角形、L行、T型，大小粗细各种各样（图1）。有关涂布棒的制作方式可参考：一种简易好用的涂布棒制作方法。

图1  各种各样的涂布棒

（从左到右依次为：不锈钢、玻璃、塑料）

  不同的涂布棒对涂布计数的结果有没有影响？是不是每涂一个板，必须要更换涂布棒？本文着重以具体试验的形式具体说明，以期为广大实验操作人员提供借鉴。

二、试验设置

  分别采用三种涂布棒共设5组试验，每组各设10个培养基平板，滴加相同浓度相同体积的菌液，A1、A2、A3所用涂布棒为采血管自制，B涂布棒为玻璃棒制作，C涂布棒为一次性塑料成品，每组具体操作时，A1组10个板，共用一个涂布棒，A2组每涂一个板更换一个涂布棒，A3组不用涂布棒，将菌液分散到平板上，倾斜摊匀即可；B组使用玻璃棒，每两个平板更换一个涂布棒；C组10个板共用一个涂布棒。

表1  试验方案设置表

三、试验结果及分析

  从表2、图2看出，A1、A2、B、C平均数均为28CFU-29CFU，各组间无明显差别，A3平均数最高，且有菌数最高值37，由此可以判断，不用涂布棒的情况下，测定的菌数最能反应样品中的菌数真实值，如果能够明确把握每100μL样品中的菌数小于200CFU，可以不用涂布棒，采用直接滴匀的方式进行接种；涂布棒的材质、大小和更换频率，对测得的菌数多少无明显影响，只要能保证菌液涂匀即可。

表2  不同涂布方案的计数结果

图2  不同试验方案的计数结果

四、结论与讨论

  （1）不用涂布棒的情况下，测定的菌数最能反应样品中的菌数真实值，可能的情况下，应首选这种方式进行接菌；

  （2）如果样品中菌数比较多，为了防止涂布不均匀，尽量使用涂布棒进行涂布，涂布棒的材质、大小和更换频率，对测得的菌数多少无明显影响，只要能保证将菌液涂匀即可；

  （3）每个稀释度至少用一个涂布棒，更换稀释度时需更换不同的涂布棒，在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换涂布棒。【1】

五、注意事项

  （1）滴加菌液前，要将平板在无菌环境下吹风干燥，去除平板表面的水分；

  （2）涂布时，用涂布棒将菌液自平板中央均匀向四周涂布扩散，切忌用力过猛将菌液直接推向平板边缘或将培养基划破；

  （3）涂布时要保持手法的稳定性和一致性，涂布速度要适中，避免过快导致微生物分布不均或过慢导致培养基干燥；

  （4）重复实验是确保实验结果准确性的重要手段。通过在同一稀释度下涂布多个平板并统计菌落数的平均值，能够减小实验误差并提高数据可靠性。在重复实验中，如果某个平板的菌落数与其他平板相差较大，说明可能存在操作失误，这时应该舍弃该数据，并找出原因进行修正。

参考文献：

【1】张敬慧,郭云霞主编.酿酒微生物 第2版[M].中国轻工业出版社.2021:321.

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