Les Endo琼脂培养基的原理及使用方法

张立鑫

2025/8/12 11:40:47 青岛海博生物

一、检验原理：

用途：用于水中大肠菌群滤膜法计数。

原理：酵母浸粉提供B族维生素；酸水解酪蛋白、蛋白胨及䏡胨提供氮源和碳源，维生素和矿物质；乳糖作为可发酵糖类；磷酸氢二钾和磷酸二氢钾作为pH缓冲剂；氯化钠用于维持细胞渗透压；去氧胆酸盐和十二烷基硫酸钠能够抑制革兰氏阳性细菌的生长；加入95%的乙醇可以提高培养基的抑菌性；亚硫酸钠可以使碱性品红还原脱色；碱性品红为指示剂；琼脂是培养基的凝固剂。发酵乳糖的细菌产生乙醛和酸，乙醛与亚硫酸钠和品红化合物结合变为紫红色，快速发酵乳糖的细菌使碱性品红结晶析出产生金属光泽。

二、培养基配方（g/L）：

酵母浸粉	1.2
酸水解酪蛋白	3.7
蛋白胨	3.7
䏡胨	7.5
乳糖	9.4
磷酸氢二钾	3.3
磷酸二氢钾	1.0
氯化钠	3.7
去氧胆酸盐	0.1
十二烷基硫酸钠	0.05
亚硫酸钠	1.6
碱性品红	0.8
琼脂	15.0
pH值7.2±0.2（25℃）

三、试验方法：

1、称取本品51.0g，另取20 mL 95%的乙醇，加入980mL蒸馏水中搅拌加热溶解，分装，121℃高压灭菌15min，冷却至45℃-50℃左右时，倾入直径50mm-60mm的无菌平皿中备用。

2、10倍梯度稀释法制备质控菌株菌悬液，吸取适宜梯度的菌悬液接种于培养基和HB0177-8参比TSA培养基。

3、放置于36℃±1℃需氧培养24h ±2h，观察试验结果。

四、试验结果判断：

接种以下质控菌株，放置于36℃±1℃需氧培养24h ±2h。结果如图1。

质控菌株	菌株编号	接种量(CFU)	生长情况	回收率	其他特征
大肠埃希氏菌	ATCC 25922	10-200	+++	≥70%	紫红色菌落，有金属光泽
大肠埃希氏菌	ATCC 8739	10-200	+++	≥70%	紫红色菌落，有金属光泽
弗氏柠檬酸杆菌	ATCC 43864	10-200	+++	≥70%	紫红色菌落
鼠伤寒沙门氏菌	ATCC 14028	10-200	+++	≥50%	橙红色菌落
粪肠球菌	ATCC 29212	100-1000	-	/	抑制