一、实验目的

  1、检测酵母菌对不同糖类的发酵能力。

  2、区分不同酵母菌种的代谢特性（如酿酒酵母与非酿酒酵母）。

二、实验原理

  酵母菌在厌氧条件下发酵糖类生成：乙醇 + CO₂（主要产物）、少量有机酸（如乙酸、琥珀酸）

  通过培养基中添加指示剂（如酚红）可检测产酸（培养基变黄），倒置的杜氏小管可收集产生的气体，可根据发酵过程中产气多少或产不产气来判断酵母对某种糖的发酵能力，一般酵母发酵各种糖类的特性较稳定，有利于鉴定菌种。

  该试验常使用的糖类有葡萄糖、蔗糖、半乳糖、麦芽糖、乳糖、蜜二糖、棉子糖，纤维二糖、松三糖、菊芋糖、可溶性游粉等。

三、实验材料

  1.基础培养基： 

  0.6%酵母浸粉培养基 

  指示剂：0.018% 酚红溶液（pH 6.8 时呈红色，产酸后变黄） 

  待测糖类（终浓度 1-2%）：葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、半乳糖等（可过滤除菌或者单独灭菌）。

  2. 杜氏小管：倒置于试管中收集气体。 

  3. 灭菌器材：试管、移液枪、培养皿、无菌水。 

  4.菌种：酿酒酵母和热带假丝酵母

四、操作步骤

  1、培养基制备： 

  配制基础培养液（不加糖），分装至试管（每管约 5 mL），每管放入一支倒置的杜氏小管，121℃ 高压灭菌 15 分钟，冷却至 50℃ 备用。 

  糖溶液单独灭菌（110℃ 15 分钟或过滤除菌），按终浓度 1-2% 加入冷却的基础液中。

  2、接种： 

  取新鲜酵母菌落，用无菌水制成菌悬液（约 10⁶ CFU/mL）。 

  每支糖发酵试管接种 0.1 mL 菌悬液。 

  设置阴性对照（不接种）和阳性对照（已知发酵菌种）。

  3、培养： 

  试管于25-30℃静置培养24-72 小时（避免振荡，以利气体收集）。

  4、结果观察： 

  产酸：酚红指示剂由红变黄。 

  产气：杜氏小管顶部有气泡（≥10% 管体积为阳性）。

  5、结果判读

  注意：

  1、乳糖发酵阴性常见（多数酵母缺乏乳糖酶）。 

  2、迟缓发酵需延长培养至 7 天（如半乳糖对某些酵母）。

五、实验结果

  1、若小管顶部有CO2气体时，说明该菌能发酵某种糖，用杜氏管时，气体在小套管顶部。

  2、试验选用菌种若是那些有较多菌丝的酵母或类酵母，就应该用艾氏管，而且在观察时，将菌丝塞入艾氏管封闭的一端，以免二氧化碳逸出开口端液面。

  3、一般糖类发酵在2~3d内即可观察到结果，凡不发酵或弱发酵者可延长观察至10d，对半乳糖发酵时，观察的最终时间可延长到两周或1个月。

  4、常见糖类发酵模式

六、注意事项

  1、避免糖类降解：糖溶液需单独灭菌（避免高温焦化）。 

  2、无菌操作：接种时避免杂菌污染。 

  3、气体判读：小气泡可能是接种时残留，需与发酵产气区分。 

  4、指示剂选择：也可用溴甲酚紫（产酸时由紫变黄）。 

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