在2025版中国药典中规定,“制备好的培养基若不即时使用,应置于无菌密闭容器中,在2-25℃环境下保存,并在经验证的效期内使用”,而在之前版本的药典中,允许保存一年,这是由于受配制过程、灭菌条件、保存环境等因素的影响,培养基的保存效期会有所不同,因此新版本的药典规定,保存效期需进行确认。
一、胰酪大豆胨液体培养基
此培养基相对较为稳定,一般常使用高压蒸汽灭菌或过滤除菌的方法,由于高压蒸汽灭菌过程中会导致糖类不同程度的焦化、维生素的分解等问题,过滤除菌的TSB因此比高压蒸汽灭菌的TSB更易储存。经测试,高压蒸汽灭菌的TSB在25-30℃左右长期储存过程中,培养基的颜色会逐渐加深,pH也会出现一定程度的下降,若要延长保存期,可以选择过滤除菌的工艺,或者选择更低的温度保存。
注:TSB一般不采用冷冻保存。经测试,冷冻保存的TSB会出现颜色不均一的情况,但摇匀后通过微生物灵敏度测试及理化测试依然是合格的,冷冻并不会导致培养基质量出现问题。另外保存条件也受到光照和空气的影响,使用的容器内空气越少,培养基越稳定,减少空气含量或者充氮气保护都有利于延长保存期,而光照也会导致培养基内维生素类成分缓慢分解,因此培养基保存过程应尽可能避免日光或灯光长时间照射。
二、硫乙醇酸盐流体培养基
相比较与胰酪大豆胨液体培养基,硫乙醇酸盐流体培养基的保存更为苛刻。培养基中含有少量琼脂,无法采用过滤除菌方式灭菌,一般只能使用高压蒸汽灭菌的方式,由于含有更多的葡萄糖,以及没有磷酸盐缓冲,保存过程中pH下降比TSB通常更为明显。同时还需要考虑氧化层的问题,在选择容器上也很重要。为尽可能增加培养基的稳定性,减少被氧化的可能,容器可使用玻璃输液瓶、胶塞密封,装量不能太少,减少空气含量,或采用充入氮气方式可以大大的增加培养基稳定性,防止培养基被氧化。
注:硫乙醇酸盐流体培养基不可冷冻保存。培养基内含有少量琼脂,冷冻会破坏琼脂结构,导致培养基黏度下降,氧气更易渗入。
三、胰酪大豆胨琼脂培养基
此培养基的成分较为稳定,保存过程中主要需考虑培养基失水和水汽的问题。制备好的平皿在保存过程中会缓慢失水,因此需要密封保存,保存温度越高,培养基失水越快,但若保存温度偏低,保存与取用之间温差较大,则易导致水汽过多,虽然平板在2-25℃均可保存,但从长期保存和使用角度考虑,在15-25℃保存为宜。若采用密闭容器存放(如玻璃输液瓶或蓝盖瓶等),则无需考虑失水和水汽问题,可以更容易保存3个月以上的时间。
注:含琼脂的培养基不可冷冻保存。在超过25℃保存不影响培养基的质量,但会导致培养基更快失水,因此不建议长期在超过25℃环境保存。
四、沙氏葡萄糖琼脂、沙氏葡萄糖液体、马铃薯葡萄糖琼脂
SDA/SDB/PDA均含有较高的葡萄糖,保存过程中pH容易下降,因此不建议长期保存。SDB可采用过滤除菌的工艺进行灭菌延长保存期,而SDA和PDA则只能采用高压蒸汽灭菌的方式,一般实验室建议制备好的培养基在1个月内使用,或通过验证观察是否可储存更长时间。
五、0.1%无菌蛋白胨水、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
这两种培养基成分简单,且较为稳定,不含糖,不管是采用高压蒸汽灭菌还是过滤除菌的方式,都可以长时间储存,且超温保存对培养基影响不大,密闭环境中甚至可以保存数年。
注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。


















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