前言

在微生物学检测领域，选择性培养基的设计离不开高效、稳定的抑菌剂。煌绿（Brilliant Green，亦称亮绿）作为一种三苯甲烷类染料，自20世纪初期被引入微生物学以来，凭借其独特的选择性抑菌特性，已成为众多标准培养基中不可或缺的核心成分。从大肠菌群的确证试验到沙门氏菌的选择性增菌，煌绿的身影贯穿于食品微生物检测、药品质量控制及临床检验的多个环节。

一、煌绿的基本性质

煌绿属于三苯甲烷类化合物，CAS号为633-03-4，分子式为C₂₇H₃₄N₂O₄S，分子量为482.63。其外观呈金黄色闪光结晶，易溶于水和乙醇，水溶液呈特征性绿色。作为染料，煌绿广泛应用于羊毛、蚕丝、棉纤维及皮革制品的染色工业；而在微生物学领域，其抑菌特性使其成为选择性培养基的关键成分。

煌绿的抑菌作用与其三苯甲烷骨架结构密切相关。研究表明，煌绿能够干扰微生物的代谢过程，对细菌生长、菌体蛋白质的合成以及糖的利用均具有显著的抑制作用。这种抑制作用的强度因菌种而异，革兰氏阳性菌对煌绿较为敏感，多数革兰氏阴性杆菌也受到不同程度的抑制，而沙门氏菌等目标菌则表现出相对的耐受性。正是这种差异化的抑制谱，使煌绿成为理想的培养基选择性添加剂。

二、煌绿在培养基中的应用

（一）煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）

BGLB是煌绿应用的培养基之一，广泛用于多管发酵法测定大肠菌群的确证试验。

1.原理

蛋白胨提供碳氮源；乳糖作为可发酵的糖类；牛胆粉和煌绿协同作用，抑制非肠杆菌科细菌的生长。煌绿在浓度0.0133 g/L既能有效抑制干扰菌，又不妨碍大肠菌群的正常生长与乳糖发酵。

2.质控标准

根据GB 4789.3-2025标准，BGLB培养基的质量控制具有明确的指标要求：接种大肠埃希氏菌ATCC 25922后，在35℃-37℃培养24小时，应呈现培养基混浊且小倒管内气体充满1/3以上，表明产气阳性；而接种粪肠球菌ATCC 29212时，培养基应保持澄清或微混浊且不产气。目标菌生长产气、非目标菌被抑制的鲜明对比，正是煌绿选择性抑菌作用的直观体现。

图1 BGLB的阳性结果

（二）沙门氏菌检测中的应用

1.四硫磺酸盐煌绿增菌液（TTB）

TTB是一种强选择性的液体培养基，专用于沙门氏菌（特别是伤寒沙门氏菌以外的其他血清型）的选择性增菌培养。TTB的选择性基于两种关键抑制剂的协同作用：四硫磺酸盐可抑制革兰氏阳性菌及部分大肠菌群，而煌绿则进一步抑制其他革兰氏阴性杂菌。

在实际使用中，TTB基础培养基需要临用时添加碘液和0.1%煌绿水溶液。每100 mL TTB培养基中添加1支碘液和1支0.1%煌绿水溶液。煌绿在此处的作用尤为精妙——其添加量需要精确控制，浓度过低则选择性不足，杂菌过度生长；浓度过高则可能抑制目标沙门氏菌的生长。可使用提供标准化的HB4086b 0.1%煌绿水溶液，确保培养基的选择性效果稳定可靠。

2.酚红煌绿琼脂

酚红煌绿琼脂用于饲料中沙门氏菌的分离培养。其检验原理为：蛋白胨提供碳源和氮源；乳糖、蔗糖为可发酵的糖类；酚红作为pH指示剂，在pH6.8时呈黄色，pH8.1时呈粉红色，发酵糖产酸的菌落呈黄色，不发酵糖的菌落为红色；煌绿抑制革兰氏阳性菌和大多数非沙门氏菌的革兰氏阴性杆菌，特别是抑制发酵乳糖、蔗糖的细菌。通过抑菌+指示的双重设计，使得目标沙门氏菌（通常不发酵乳糖、蔗糖）在平板上呈现红色菌落，与背景和其他菌种形成鲜明区分。

鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028	肠炎沙门氏菌CMCC 50760

图2 目标菌在酚红煌绿琼脂上的形态

三、煌绿的作用机制与使用注意

1.抑菌机制

煌绿的抑菌作用具有多重靶点。煌绿对细菌的生长、菌体蛋白质的合成以及糖的利用都有显著的抑制作用。与枸橼酸钠等其他抑制剂相比，煌绿的抑制作用更为强烈。这种广谱但程度不同的抑菌特性，使得煌绿能够在抑制大量杂菌的同时，为特定目标菌（如沙门氏菌、大肠菌群）保留生长空间。

2.浓度控制的重要性

煌绿在培养基中的添加浓度是决定选择性强弱的关键因素。不同培养基中煌绿的添加量差异显著：BGLB中为0.0133 g/L，而TTB中0.1%煌绿水溶液的添加量约为1 mL/100 mL。更重要的是，不同批次的煌绿对目标菌的毒性可能存在差异，因此不能千篇一律地按固定浓度配制。

3.与其他抑制剂的协同

煌绿在培养基中往往不是“单兵作战”，而是与其他抑制剂协同发挥作用。在BGLB中，煌绿与牛胆盐共同抑制非肠杆菌科细菌；在TTB中，煌绿与四硫磺酸盐形成双重抑制；在SS琼脂中，煌绿与胆盐、枸橼酸钠等成分协同，提升沙门氏菌和志贺氏菌的分离效率。这种多组分的协同抑制体系，大大增强了培养基的选择性，使目标菌的检出更加准确可靠。

四、相关培养基的采购

青岛高科技工业园海博生物技术有限公司有上述相关产品，客户可根据实际情况和用途进行选用。

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