【原理】
此培养营养丰富,白喉棒状杆菌更易生长和产毒,所以此培养基很适于测定白喉棒状杆菌产毒能力。
【成分】
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甲液: |
猪胃消化肉浸液 |
200ml |
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麦芽糖 |
3g |
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乳酸 |
0.7ml |
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乙液∶ |
猪胃消化肉浸液 |
800ml |
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琼脂 |
15g |
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氯化钠 |
5g |
【制法】
(1)艾立克琼脂制备:取猪胃消化肉浸液200ml、麦芽糖3g及乳酸0.7ml混和煮沸,并加入15%氢氧化钠2.5ml,调整至pH7.8。煮沸,以滤纸过滤,制成甲液。取猪胃消化肉浸液800ml、琼脂15g及氢化钠5g,混合加热溶解,测定pH并调整至7.8,以绒布过滤,制成乙液。然后将甲乙二液混和,摇匀,分装,每管15ml。115℃灭菌15分钟,放于4℃冰箱中备用。
(2)猪胃消化肉漫液的制备:先要制备猪胃的消化汤和牛肉浸液。猪胃消化汤的制备:取新鲜猪胃剖开洗净,去脂绞碎。称取420g,装入大烧瓶内,加入蒸馏水1000ml,再加浓盐酸10ml,摇匀。置50℃温箱中,消化24小时,每小时搅动1次,在最后6小时内,不需搅动,使其静置消化。取出后煮沸,用滤纸过滤,装入瓶内,经15分钟的灭菌备用。牛肉浸液的制备。将2份猪胃消化汤与一份牛肉浸液混合,在混合液中按每1000ml加20%氯化钙溶液5ml及第3号䏡胨(Proteose一peptone №3)5g,混匀后煮沸,然后加15%氢氧化钠约2ml,调整pH至7.8,煮沸,滤纸过滤,分装,121℃灭菌15分钟,备用。
(3)艾立克氏琼脂平皿的制备:加热溶解艾立克氏琼脂15ml/管,含800~1000u的白喉抗毒素;无菌兔血清(或马、牛血清,过滤除菌后加热60℃、30分钟灭活后使用;干燥的滤纸条(75mm长,10mm宽)取烤干无菌平皿一个,用无菌吸管吸取2ml无菌血清(兔或马)放入平皿中内。将冷却至55℃的艾立克氏琼脂15ml注入平皿中,旋转平板,使充分混合,待凝固后,将已消毒浸有白喉抗毒素800~1000u的纸条(长约75mm,宽10mm)平铺于平皿中央(贴前要注意使滤纸上过剩的抗毒素流尽)。用前将平皿中置37℃孵育箱中烤45~60分钟,待用。
【用途】
测定白喉棒状杆菌毒素产生。即将吕氏血清斜面上生长的纯菌大量划线接种于艾立克平皿上。划线的方向应与纸条相交成直角,接种线要细,不可中断,同一平皿中可接种14个菌株。置37℃培育箱中孵育,于24、48、72小时各观察结果1次。阳性结果:在纸条与接种的细菌连接处两侧,可见白色沉淀。阴性结果:无白色沉淀产生。
【注意事项】
1.每次试验,必须同时用已知的阳性、阴性菌种对照。
2.此培养基琼脂的硬度及平皿中中培养基的厚度对进行体外毒力测定有很大的关系。培养基越坚硬越厚,反应出现愈慢。过硬过厚,甚至可以阻止反应的出现,如用直径10cm的平皿中,倾入15ml的培养基及2ml血清,比较合适。
3.培养基必须保持澄清。否则很难观察白色沉淀的产生。
4.在制备艾立克琼脂时,必须分为两部分准备,因乳酸不能和琼脂混合并加热,否则乳酸将琼脂液化,影响琼脂的坚度。


















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