（二）芽孢杆菌的分离

海水中有芽孢杆菌属（Bacillus），如玻璃样芽孢杆菌、杆状芽孢杆菌、华丽芽孢杆菌等好气菌属。也有嫌气性的梭状芽孢杆菌属。淡水中常有蜡质芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌等．

1 ．培养基成分及其制备

（1）芽孢杆菌培养基（I）:

K₂HPO₄  0.5 克

MgSO₄ ·7H₂O    0.5 克

柠檬酸钢铁铵0.5克

柠檬酸2 克

甘油20 克

L-谷氨酸4 克

陈海水（或自来水）1000 毫升

pH 7.4

( 2 ）巨大芽孢杆菌培养基（II）:

酵母膏2.5 克

胰胨1 克

陈海水或蒸馏水1000毫升

琼脂18 克

将各成分放于水中加热溶解，调pH 为7.2 分装，121℃ 蒸汽下灭菌20 分钟，制成平板和斜面。

( 3 ）刺激芽孢生长培养基：

蛋白胨10 克

酵母浸出膏3 克

淀粉3 克

MgSO₄ 0.1 克

KH₂PO₄ 1.5 克

Na₂HPO₄ 50 克

水1000 毫升

制法：将上述的成分混和，加热溶解。调pH 为7.8 ，用滤纸过滤。分装于15 × 155 毫米的试管，每管约10 毫升．于121 ℃ 下的蒸汽压下灭菌15分钟，存于冰箱备用。

用途：用于刺激梭状菌迅速产生芽孢，即使非常不易产生芽孢的魏氏杆菌，在此培养中也能迅速长出芽孢。

2 ．分离步骤

（1） 将样品制成悬浮液．置于80 ℃ 水浴锅中加热10-20 分钟，杀死不形成芽孢的其他种菌体（包括所要分离的菌体也被杀死，但芽孢不死，可萌发）。

（2）取出静置10 分钟。

（3）按划线法或稀释法进行分离纯化。