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SS培养基有效保存期内的质量控制
2010/11/1 9:12:25 浙江预防医学
    为了给临床微生物检验提供方便,提高工作效率和检测质量,我们对制备的沙门-志贺菌培养基(简称SS培养基)进行保存期实验研究 ,现将结果报告如下。 

材料与方法

1 材料 购入的SS干燥培养基,按分值计算法检定培养基质量;判定标准,见表1。

表 1  SS培养基合格分值

项目

大肠埃希菌

痢疾志贺菌

鼠伤寒沙门菌

菌落直径分值

≥10.000

≥10.000

≥10.000

菌落差分值

≥2.595

≥-1.825

≥0.355

生长率分值

≥5.000

≥5.000

≥5.000

小计分值

≥27.595

≥13.175

≥15.355

总分值

≥56.125

 

 

2 方法 按使用说明称取SS干燥培养基,置于三角烧瓶中,加入蒸馏水,加热煮沸至泡沫消失,冷却至50℃~60℃,在生物安全柜内倾注入已灭菌的一次性使用塑料平皿中,用包装袋密封包装,置于普通冰箱内,备用。将指示菌菌种管打开,分别接种于营养肉汤中,于 37℃培养18—24 h 。取一接种环营养肉汤菌悬液,接种在营养琼脂上,37℃培养l 8~2 4 h 。挑取单个菌落,置于营养肉汤中,制成悬液,然后作l0-6稀释,取10稀释度菌悬液置于被检定培养基平板和对照1号培养基上,用L棒涂布在整个培养基表面 (使菌落控制在50—100cfu/皿范围内) 。置于37℃培养24h 。计数菌落数,测量每个菌落直径(精确至0.02mm) ,计算平均菌落直径。 

结  果

1 菌落直径和生长率 新配制的SS培养基,分别接种3株指示菌,分别测量菌落直径和生长率。在新配制的培养基上;大肠埃希菌平均菌落直径为1.0 4 m m,生长率为11.7%;痢疾志贺菌平均菌落直径为2.06 m m,生长率为70.2%;鼠伤寒沙门菌平均菌落直径为2.35mm,生长率为101.2%。当在 4℃冰箱内密封保存10 W后;大肠埃希菌平均菌直径增大为1.81m m,生长率上升为51.4 %;痢疾志贺菌平均菌落直径缩小为1.33mm,生长率下降为56.2%;鼠伤寒沙门菌平均菌落直径缩小为1.77 mm,生长率下降为 88.5 %。见表 2 。  表 2 指示菌在 S S培养基上菌落直径和生长率

 

观察时间

大肠埃希菌

痢疾志贺菌

鼠伤寒沙门菌

菌落直径(mm)

生长率(%)

菌落直径(mm)

生长率(%)

菌落直径(mm)

生长率(%)

第1天

1.04

11.7

2.06

70.2

2.35

101.2

第1周

1.20

11.6

2.10

68.9

2.25

100.3

第2周

1.22

12.5

2.08

68.8

2.26

99.9

第3周

1.25

13.2

1.98

68.3

2.18

99.6

第4周

1.28

13.9

1.88

67.8

2.20

98.4

第5周

1.37

13.9

1.76

66.2

2.13

98.5

第6周

1.38

14.3

1.78

66.4

2.10

97.9

第7周

1.44

34.7

1.62

65.5

2.02

97.3

第8周

1.42

36.2

1.64

62.1

1.94

96.5

第9周

1.59

47.9

1.50

58.5

1.88

90.1

第10周

1.81

51.4

1.33

56.2

1.77

88.5

 

2 菌落直径分值和生长率  新配制的SS培养基采用分值计算法鉴定培养基,质量总分值为 100.87,其中大肠埃希菌小计分值为39.45;痢疾志贺菌小计分值为 33.76;鼠伤寒沙门菌小计分值为27.66。在4℃冰箱内存放至第6周,总分值为63.89,放至第7周,总分值降至4 9.34 < 56.125 ,见表 3 。 

表 3 指示菌在 SS培养基上菌落直径分值和生长率分值

观察时间

大肠埃希菌

痢疾志贺菌

鼠伤寒沙门菌

总分值

菌落直径分值

生长率分值

分值小计

菌落直径分值

生长率分值

分值小计

菌落直径分值

生长率分值

分值小计

第1天

19.25

5.87

39.45

20.39

5.58

33.76

16.31

5.03

27.66

100.87

第1周

11.11

5.90

30.51

21.14

5.44

27.75

13.91

4.77

19.85

78.11

第2周

15.18

5.29

33.9

20.76

5.43

27.26

14.15

4.65

20.02

81.18

第3周

14.50

5.38

33.16

18.90

5.37

24.84

12.23

4.56

17.61

75.61

第4周

13.82

5.19

32.14

17.04

5.32

22.42

12.71

4.21

17.94

72.40

第5周

11.79

5.16

29.62

14.80

5.16

19.43

8.63

4.24

13.44

62.49

第6周

11.56

5.03

29.22

15.18

5.14

19.88

10.31

4.06

14.79

63.89

第7周

10.20

-1.51

21.02

12.20

5.06

16.02

8.39

3.89

12.30

49.34

第8周

10.66

-1.99

21.09

12.57

4.68

16.12

6.48

3.65

9.85

47.05

第9周

6.81

-5.75

12.64

9.96

4.28

12.41

5.04

1.77

6.13

31.18

第10周

1.83

-6.87

5.44

6.30

4.03

8.14

2.40

1.31

2.47

16.06

 

 

讨 论 本次实验的 3株指示菌在 4 ℃冰箱内存放不同时间的培养基的菌落直径和生长率结果表明,随着存放时间的延长,菌落直径缩小和生长率下降,但很难判定培养基的质量优劣。

本次实验选用质量合格的SS培养基 (总分值100.87>56.125 ,其中大肠埃希菌分值为39.45>27.595,痢疾志贺菌分值33.76>13.175,鼠伤寒沙门菌分值27.66>15.355 ) ,配制一批平板,密封存放在4℃冰箱内,每隔一周用 3株指示菌鉴定,采用分值计算法计算质量分值,实验结果表明:在 4℃条件下密封存放 6 W,质量仍达到合格分值 (63.89>56.125)要求 ,但 鼠伤寒沙门菌的分值自第5周起,质量分值己小于合格分值(13.44<15.335 ) 。存放第 7周时 ,质量总分值已降至49.34 ,属不合格质量分值,从3株指示菌的质量分值显示 ,大肠埃希菌和鼠伤寒沙门菌的分值均未达到质量合格分值,而痢疾志贺菌的质量分值仍为合格。从菌落直径分值和生长率分值的结果表明,当指示菌的质量分值不合格时,首先出现不合格是生长率分值。实验结果表明制备好的SS培养基在 4℃冰箱内存放 6 W,对肠道致病菌的分离鉴定无不良影响。 

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