标本处理

刮取营养平板上的过夜新鲜培养物1 环～2 环，至装有1 mL0.85%灭菌生理盐水的Eppendorf 管内，混匀。4 ℃～8 ℃，12 000 r/min 离心15 min，弃去上清。沉淀加入100 μL 灭菌去离子水中，混匀。100 ℃煮沸12 min，12 000 r/min离心5 min，上清即为PCR 扩增模板，可直接用于PCR 反应。

多重PCR

五种致泻大肠埃希氏菌目的基因多重PCR 扩增加样体系见表5。PCR 反应条件：预变性94 ℃ 5 min。变性94 ℃ 30 s，复性63 ℃ 30 s，延伸72 ℃ 1.5min，30 个循环。最后72 ℃延伸5 min