高压蒸汽灭菌和干热灭菌

2015-3-2 9:25:49 青岛海博生物

原理
高压蒸汽灭菌是实验室最常用的灭菌方法，适用于培养基，生理盐水，各种缓冲液及玻璃器皿的灭菌。常用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，灭菌锅有立式、卧式和手提式三种。图11-1 所示常用手提式灭菌锅。高压蒸汽灭菌的原理是通过提高灭菌锅内的蒸汽温度以达到灭菌目的，即，使灭菌锅夹层的水加热、沸腾，不断产生蒸汽，以排除冷空气，直至空气排净后（约排气10-15 分钟）关闭放气阀，使蒸汽锅密闭，这时随蒸汽压不断上升，锅内的温度也随之上升，当蒸汽压（饱和蒸汽压）升到1.05kg/cm2 时，锅内温度即达121.3℃，在该温度下保持20-30 分钟，可将所有微生物及芽孢杀死。灭菌所需时间和温度取决于被灭培养基中营养物的耐热性、容器体积大小和装物量等因素。若灭砂土、石蜡油或含菌量大的物品则应适当延长灭菌时间。
干热灭菌适用于玻璃器皿的灭菌。常用电热烘箱进行，其结构如图11-2 所示。干热灭菌主要是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到杀灭微生物的目的。细胞内蛋白质凝固性与其本身含水量相关。当菌体受热时，环境和细胞内含水量越大，蛋白质凝固就越快，反之则慢。通常干热灭菌时预先将各种器皿用纸包好或装入金属制培养皿箱、移液管筒内，再放入电热烘箱，然后打开电源，加热升温至150-160℃，维持2 小时即可进行彻底灭菌。
仪器与材料
1．仪器：立式高压蒸汽灭菌锅，手提式高压蒸汽灭菌锅，电热烘箱。
2．需灭菌的物品：培养基，无菌水，培养皿，用报纸包好的吸管等。
方法
1、高压蒸汽灭菌
（1）加水：向灭菌锅夹层加蒸馏水至适当水位刻度；
（2）装料：放入需灭菌的物品；注意：装量适当，使瓶口或试管口向中心摆放，不要紧贴锅内壁，以防冷凝水沾湿棉塞！
（3）加盖：盖好灭菌锅，对称拧好螺栓；
（4）灭菌：通电加热，待灭菌锅排出大股水蒸汽时记时15 分钟后，关闭排气阀。继续加热至所需条件，如压力达1.05kg/cm2 即121.3℃，维持20-30 分钟；
（5）降压：灭菌后立即关闭电源，待压力降至0 时，打开排气阀，放空剩余蒸汽。再打开锅盖，取出灭菌物品；
（6）后处理：灭菌完毕，放空夹层内的水，保持锅内干净。
2、干热灭菌
（1）装料：打开烘箱门，放入需灭菌的物品，关好烘箱门；（注意：勿使纸包物品紧靠烘箱壁，以免引起火灾！）；
（2）灭菌：打开排气孔，接通电源，加热升温至160℃，关闭排气孔，维持2 小时；（注意：灭菌温度绝对不可以超过180℃！）
（3）降温：灭菌后，立即关闭电源，将温度旋钮转至0。待温度降至20℃以下时，打开烘箱门，取出灭菌物品。
3、灭菌前玻璃器皿的包装
（1）吸管、滴管的包装：
① 裁纸：将8 开报纸裁成约5cm 宽的长纸条；
② 包法：将纸条一端折进约3 cm 长使成双层，将吸管或滴管包进双层纸内，并与纸条形成约30°夹角，然后在桌面上不停地卷动，让纸条成螺旋状包在管外，最后将多余的纸条回折即可。见图11-3。
（2）培养皿的包装：将洁净干燥的培养皿装入铁皮箱，每箱60 套，盖好箱盖即可。