一、培养基用途:
用于空肠弯曲菌的增菌(GB标准)。
二、培养基成分及使用方法:
1.培养基成分
成分 |
含量(g/1000mL) |
动物组织酶解物 |
10.0 |
乳白蛋白水解物 |
5.0 |
酵母浸粉 |
5.0 |
氯化钠 |
5.0 |
α-酮戊二酸 |
1.0 |
丙酮酸钠 |
0.5 |
偏亚硫酸氢钠 |
0.5 |
碳酸钠 |
0.6 |
pH(25℃)7.2±0.2 |
2.使用方法
称取本品 27.6g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,每瓶100mL,121℃高压灭菌15min,冷却至45-50℃时,每瓶培养基加入5mL无菌裂解脱纤维羊或马血和1支Bolton肉汤添加剂,混匀,备用。
注:培养基高压灭菌后有少量沉淀。
三、原理:
动物组织酶解物和乳白蛋白水解物提供碳源、氮源;酵母浸粉提供各种维生素;氯化钠维持渗透压;丙酮酸钠和偏亚硫酸氢钠能中和培养基的有毒物质,也能增强菌的耐氧性,有助于未死受损细菌细胞的复苏;α-酮戊二酸提供生长因子,促进空肠弯曲菌的生长;碳酸钠提供空肠弯曲菌最有利的PH生长环境;Bolton肉汤添加剂中,头孢哌酮和多黏菌素B抑制革兰氏阴性菌,万古霉素和三甲氧苄胺嘧啶乳酸盐抑制革兰氏阳性菌,两性霉素B抑制酵母、霉菌的生长。
四、实验结果:
按使用方法制备培养基,接种以下质控菌株,在42±1℃微需氧培养24-48h。
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
参比或计 数培养基 |
方法 |
生长情况 |
其他特征 |
空肠弯曲菌 |
ATCC33291 |
10-100 |
无抗生素CCD |
半定量 |
在CCD上>10CFU |
在CCD上菌 落呈灰白色 |
大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
1000-5000 |
TSA |
半定量 |
在TSA上<100CFU |
/ |
金黄色葡萄球菌 |
ATCC6538 |
1000-5000 |
TSA |
半定量 |
在TSA上<100CFU |
/ |
由于该培养基加入脱纤维羊血或马血后培养基颜色较深,难以观察试管中是否有菌生长,所以用无抗生素CCD和TSA检验是否有菌生长。
图1 Bolton肉汤微生物质控结果
a:空白对照,b:空肠弯曲菌,c:大肠埃希氏菌,d:金黄色葡萄球菌
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