一、盲样考核简介

  盲样考核，是指将未知详细样品信息的待测样品发放给相关检测机构，要求检测员在指定时间内、完成特定样品检测项目并提供相应报告的一种考核形式。盲样考核作为实验室质量控制的重要环节，可直接、客观地反映实验室检测能力，也是实验室水平的重要体现。

  对从事检验检测的行业同仁来说，盲样检测是必须掌握的专业技能之一。尤其对于CMA或CNAS认证的实验室，每年更是要面临各类盲样考核，其中能力验证是盲样考核最重要且最主要的来源。

  能力验证是对实验室的技术能力的证明，在一个评审周期内若能多次参加能力验证，既可提升实验室的检测、技术能力，同时也是自身技术水平的彰显。本文主要就微生物盲样检测过程中需要注意的事项进行详细阐述。

二、物品准备

  1、合理保存、及时检测

  与一般样品检测不同的是，微生物盲样的检测，具有很强的时效性。因为盲样中的菌体是活菌体，随着时间的延长，样品中菌体的含量会有所下降，尤其对含定量菌的盲样来说，拿到样品进行第一时间检测尤为重要。如果不能及时检测，或者对检测时间有特殊规定时，要将样品进行合理保存，避免条件不当，造成样品中菌数发生较大变化。

  2、周密的准备工作

  （1）操作人员：无论是否需要做盲样考核，都要加强日常管理，按照实验操作标准规范来做，熟悉方法原理和操作流程，如果平时严格按照操作规范来做，盲样考核一定没问题。

  （2）试剂溶液的准备：需根据检测指标的不同配备对应且充足的试剂溶液，并进行校准以保证实验试剂的准确性。

  （3）标准容器：即量具和存放溶液的容器，诸如各个规格的大肚移液管、刻度吸管、容量瓶、锥形瓶等等，都要在进行盲样考核之前清洗干净，必要时可以泡酸处理。同时实验用水、试剂等物质也要提前确定在有效期内且数量充足。

  3、仔细阅读作业指导书

  对于盲样考核来说，作业指导书就是方向标，会告诉你大量关键信息，尤其对微生物检测来说，仔细研读作业指导书，严格按照要求来做，显得尤为重要。

三、操作要点

  1、准确性：所用容器尽量与作业指导书中所述一致。在对冻干菌株盲样进行检测时，虽然大多数步骤都是相似的，但仔细对比，还是有很多不同。比方说容器，样品处理阶段，有的实验室喜欢用锥形瓶，有的喜欢用广口瓶，还有的喜欢用均质袋，并且即使同种容器，规格不同，也会使检验结果差异较大（图1）。

  锥形瓶与广口瓶：

  均质袋：

图1  试验中常用的稀释容器

  2、有关振荡混匀：通常样品的混匀需要用到旋涡振荡器或者拍打式均质器，但有些操作人员也会用手工进行晃动混匀。旋涡振荡20s的效果，如果用手工拍打，需要80多下才能等同，但通常来讲，人工拍打，一般不会拍打那么多次，尤其对于一些无色液体（比如水样）样品，可能会简单摇晃几下就认为已经混匀。而实际上，样品中的菌体并未被均匀分散开，这就造成吸取样品液的时候，吸取的菌数不均匀，并进一步影响后续的稀释过程，直接导致检测结果的误差。所以，在微生物盲样检测过程中，应尽量使用振荡器进行混匀，而非手工摇匀。

  3、有关泡沫：样品经过振荡混匀之后，通常上面会产生大量泡沫（图2）。此时，一定不能直接吸取样液进行稀释，而应该静置一段时间，等泡沫消失之后再进行吸取、稀释和计数。如果不这样操作，就会导致大量菌体漂浮在上层泡沫中，造成检测的结果菌数偏低。

图2  旋涡振荡器震荡后样品液体表面的泡沫状态

  4、操作：有时候为了试验需要，需要将少量的样品进行转移到较大的容器中，一定要保证所有的样品尽量全部转移。比如说，用1mL稀释液溶化样品后，如果只吸取1mL进行转移，就会漏掉很多菌体。正确的做法应该是多吸几次，保证样品尽量全部转移。

  5、培养条件：对于微生物计数的培养基的温度控制，尤为重要。有的作业指导书中明确要求是46℃进行倾注，这个必须是经过恒温水浴锅水浴之后才能确定的，有的人通常只凭经验，用手摸着不烫就进行倾注，这样也会导致结果的差异。对于有些菌种48℃的培养基倾注计出的菌数和46℃倾注培养出的数目是会有很大的差别的。

  规范操作检测结果：

  不规范操作检测结果：

图3  同一瓶样品规范操作和不规范操作的检验结果差异

  综上所述，微生物检测过程的每个环节，都会造成结果不同程度的差异。而这些差异叠加起来，误差就会越来越大，造成最终结果的偏离（图3）。尤其当样品中菌数本身就偏低的情况下，这种误差更会逐级放大，最后甚至造成有菌也检测不出来的情况。所以，提醒每一位参与盲样检测的人员，都应该严格试验操作，格外注意试验过程的细节。

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