一、试验原理：

  丁酸梭菌又叫酪酸梭菌，是一种严格厌氧的革兰氏阳性芽孢杆菌，菌体呈杆状或稍有弯曲，周身鞭毛，能运动。酪酸梭菌是人的正常肠道菌群之一，有氧条件不生长，革兰氏染色为阳性，能够发酵乳糖、麦芽糖、棉籽糖、甘露醇等碳水化合物产酸，不发酵山梨醇，硝酸盐还原试验为阴性。

二、试验步骤及结果

  1、将1小包丁酸梭菌活菌散溶解于含9mL无菌生理盐水的试管内，取1mL菌液加入至厌氧疱肉培养基内，置于35℃恒温箱内培养。

图1疱肉培养基

  培养24h后，疱肉培养基浑浊，并产生大量气泡。

  2.用接种环挑取疱肉培养基菌液划线接种于TSA平板，放入厌氧袋内，并放入厌氧产气包，置于35℃恒温箱内进行厌氧培养，另划线接种TSA平板，置于有氧条件下35℃恒温箱进行培养。

图2 TSA平板上的菌落形态

  培养24h后，有氧条件培养下的TSA平板上无任何菌落生长，厌氧条件培养下的TSA平板细菌生长良好，菌落为白色且形状不规则，沿接种线向周围扩散生长，表明该菌生长条件为严格厌氧，且具有较强动力。

  3.从纯培养后的TSA平板上挑取菌落进行革兰氏染色，在油镜下观察菌体形态。

  该菌的革兰氏染色为阳性，显微镜下菌体为紫色杆状，两端钝圆，部分菌体稍有弯曲。

  4.挑取TSA上纯培养的单菌落至9mL无菌生理盐水试管内，分别接种于乳糖、麦芽糖、棉籽糖、甘露醇、山梨醇和硝酸盐还原生化管，置于35℃恒温培养箱内厌氧培养。

图4 生化反应鉴定

  培养24h后，该菌生化反应结果为乳糖阳性（变黄）、麦芽糖阳性（变黄）、棉籽糖阳性（变黄）、甘露醇阳性（变黄）、山梨醇阴性（颜色不变）、硝酸盐还原阴性（加试剂不变色，加锌粒后变红），该结果符合丁酸梭菌的典型生化反应特征。

三、注意事项

  本培养基仅为细菌鉴定的一部分，需做其他补充试验。

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