一、生孢梭菌简介

  生孢梭菌（Clostridium sporogenes）为梭状芽孢杆菌属，严格厌氧，对氧气敏感，生长后有很强的恶臭味，触酶阴性，在中国药典及国外的药典标准中常用于培养基的灵敏度及适用性检验。

二、活化方法

  1.硫乙醇酸盐流体培养基（FTM）：在药品的检验中常用FTM进行厌氧菌的检验，生孢梭菌可以使用FTM进行活化和培养，在氧化层以下生长，初期生长呈颗粒状或条状生长，后期呈浑浊状生长。

  注：生孢梭菌在FTM培养基中活化成功后，应及时进行转接或保存，两天以后生孢梭菌会逐渐死亡和自溶。

  2.庖肉培养基：配制时可在培养基表面覆盖约7mm厚的液体石蜡隔绝空气，灭菌后接种生孢梭菌，无需厌氧设备即可培养，36℃培养24-48h。

  3.血平板/哥伦比亚琼脂：将生孢梭菌的冻干粉溶解后涂布至血平板或哥伦比亚琼脂平板（若采用瓷珠或甘油保存法，同样接种至平板即可），迅速放入厌氧培养袋或厌氧培养箱中36℃培养24-48h，生孢梭菌呈淡黄色不规则菌落，并有恶臭味。

  注：生孢梭菌接触氧气容易死亡，因此在进行平板培养时应在厌氧操作箱内进行，使用的平皿应保持良好的透气性，确保平皿与厌氧环境气体流动，不可使用封口膜缠绕平皿，若平皿内残留氧气，极易容易培养失败。

三、实验室保存及复苏方法

  长期保存：普通实验室可使用甘油法或脱脂牛奶进行超低温冷冻保存，将培养好的生孢梭菌转接至液体菌种保存管或脱脂牛奶菌种保存管中（尽可能挑取较多菌苔），用移液枪吹打分散均匀，置-80℃超低温冰箱或液氮罐中冷冻保存，至少可存活两年以上。复苏时，取出菌种保存管，快速解冻，将菌液加入至硫乙醇酸盐流体培养基/庖肉培养基或涂布至血平板/哥伦比亚琼脂平板36℃厌氧培养24-48h。

  短期保存：将生孢梭菌活化至庖肉培养基中，置于2-8℃冰箱中冷藏保存，生孢梭菌可存活数月，活化时吸取少量菌液转接至硫乙醇酸盐流体培养基/庖肉培养基或涂布至血平板/哥伦比亚琼脂平板36℃厌氧培养24-48h。

四、菌悬液的制备及使用

  进行培养基的灵敏度检查时，可用0.1%蛋白胨水或pH7.0氯化钠缓冲液快速将生孢梭菌制成10倍稀释系列菌悬液，立即使用，此操作建议在厌氧操作箱内进行。若在空气中操作，从稀释菌液置接种结束转入厌氧环境培养，整个过程时间宜控制在15min之内。

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