1．分析目标化合物
三氯苯咪唑，5－氯－6－(2，3－二氯苯氧基)－苯并咪唑－2－酮
2．仪器设备
带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪。
3．试剂
使用附录2所列试剂。
4．标准品
三氯苯咪唑：含三氯苯咪唑99％以上，分解点为176℃。
5－氯－6－(2，3－二氯苯氧基)－苯并咪唑－2－酮：含5－氯－6－(2，3－二氯苯氧基)－苯并咪唑－2－酮98％以上。
5．标准溶液的制备
a 5－氯－6－(2，3－二氯苯氧基)－苯并咪唑－2－酮化方法
标准品中加入1mL无水乙醇及1mL乙酸溶解，加入1mL过氧化氢，塞紧，振荡混匀后，在100℃加热2小时，放置至室温。加入7mL水，振荡混匀。
b 净化方法
十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱(360mg)中依次加入10mL甲醇及10mL水，弃去流出液。柱中注入a 5－氯－6－(2，3－二氯苯氧基)－苯并咪唑－2－酮化方法所得的溶液后，注入10mL水，弃去流出液。柱中注入10mL甲醇，收集流出液于磨口减压浓缩器中，40℃以下除去甲醇。残留物中加入1.0mL甲醇溶解，此为标准溶液。
6．试验溶液的制备
a 提取方法
肌肉：尽可能除去脂肪层，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。
脂肪：尽可能除去肌肉层，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。
肝脏和肾脏：搅碎混合均匀后，称取其5.00g。
加入25mL乙腈和10g无水硫酸钠，搅拌后，以每分钟3000转离心分离5分钟，乙腈层移入100mL分液漏斗中。加入25mL乙腈饱和正己烷，用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，乙腈层移入磨口减压浓缩器中。离心管的残留物中加入25mL乙腈，激烈振荡1分钟后，按上述同样条件离心分离，乙腈层加入上述分液漏斗的乙腈饱和正己烷中。用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，合并乙腈层于减压浓缩器中。加入10mL正丙醇，40℃以下除去乙腈与正丙醇。
b 5－氯－6－(2，3－二氯苯氧基)－苯并咪唑－2－酮化方法
将a 提取方法所得的溶液按照与4．标准溶液的配制中a 5－氯－6－(2，3－二氯苯氧基)－苯并咪唑－2－酮化方法相同的操作进行。
c 净化方法
将b 5－氯－6－(2，3－二氯苯氧基)－苯并咪唑－2－酮化方法所得的溶液按照与5．标准溶液的配制中b 净化方法相同的操作进行，此为试验溶液。
7．操作方法
a 定性试验
按下列操作条件下进行试验，试验结果应与标准溶液的一致。
操作条件
柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5μm）。
柱：内径4.0～6.0mm，长150mm的不锈钢管。
柱温：40℃。
检测器：波长295nm。
流动相：乙腈：0.025mol/L磷酸二氢钠溶液（1：1）混合溶液。调整流速使5－氯－6－(2，3－二氯苯氧基)－苯并咪唑－2－酮约6分钟流出。
b 定量试验
根据与a 定性试验相同操作条件所得的试验结果，峰高法或峰面积法定量。
8．定量限
0.01 mg/kg（以5－氯－6－(2，3－二氯苯氧基)－苯并咪唑－2－酮计）
9．注意事项
（1）标准溶液的配制
① 将三氯苯咪唑标准品溶解在甲醇中，作为标准原液（三氯苯咪唑109mg／L，5－氯－6－(2，3－二氯苯氧基)－苯并咪唑－2－酮为100mg／L）。本标准原液保存在0～4℃，6个月内稳定。
② 将5－氯－6－(2，3－二氯苯氧基)－苯并咪唑－2－酮标准品溶解在甲醇中，作为标准原液（5－氯－6－(2，3－二氯苯氧基)－苯并咪唑－2－酮100mg／L）。本标准原液保存在0～4℃，6个月内稳定。
③用乙醇将三氯苯咪唑标准原液递减稀释，按照与试验溶液相同的方法经乙酸和过氧化氢衍生化、净化的溶液作为制作标准曲线用的标准溶液。
④用甲醇将5－氯－6－(2，3－二氯苯氧基)－苯并咪唑－2－酮标准原液递减稀释，作为标准溶液。本标准溶液用于高效液相色谱法中三氯苯咪唑衍生物保留时间的确证、紫外可见吸收光谱和质谱的确证。
（2）其他
使用本检测方法检出三氯苯咪唑时，最好用带紫外可见多波长检测器和质量检测器的高效液相色谱仪确证。