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改良胰蛋白胨大豆液体培养基(mTSB)的原理和使用方法
段亚可
2024-12-20 10:25:13 青岛海博生物

一、试验用途及原理

  改良胰蛋白胨大豆液体培养基(mTSB)用于产志贺毒素大肠埃希氏菌样品的制备和增菌。

  胰酪蛋白胨、大豆蛋白胨在培养基中作为营养物质提供菌体生长所需要的氮源、维生素、生长因子等;氯化钠维持体系渗透压平衡;三号胆盐为抑制剂,抑制革兰氏阳性菌的生长;磷酸氢二钾为菌体生长提供相对稳定的酸碱缓冲体系;葡萄糖提供菌体生长所需要的碳源。


二、培养基配方(g/L)

胰酪蛋白胨

17.0

大豆蛋白胨

3.0

氯化钠

5.0

三号胆盐

1.5

磷酸氢二钾

4.0

葡萄糖

2.5

pH值7.4±0.2(25℃)


三、试验方法

  1、称取本品33.0g,加热溶解于1000mL纯化水中,分装,121℃高压灭菌15min,备用。

  2、制备质控菌株,做10倍系列梯度稀释,选择适宜稀释度的菌悬液,接种至培养基中,并做空白对照。

  3、放置于41.5℃±0.5℃恒温培养箱中,需氧培养18h-24h。


四、质控结果

  接种以下质控菌株,放置于41.5℃±0.5℃的恒温培养箱中,需氧培养18h-24h。试验结果如图1所示。

质控菌株

菌株编号

接种量(CFU)

生长情况

其它特征

大肠杆菌O157

ATCC 35150

10-100

+++

浑浊

大肠埃希氏菌

ATCC 25922

10-100

+++

浑浊

金黄色葡萄球菌

ATCC 25923

100-1000

-

抑制


图1改良胰蛋白胨大豆液体培养基(mTSB)的质控菌株培养结果


五、试验注意事项

  1、使用非一次性试管等容器进行试验时,应对容器进行无菌处理,以免增加试验的不确定性或污染。

  2、灭菌结束后,应尽快取出,冷却至室温使用。


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