1、材料 
Dienes染色液，1.5%毛地黄皂苷液。 
2、方法 
（1）Dienes菌落染色：Dienes染色液是将2.5g亚甲蓝、1.5g天青II、10g麦芽糖、0.5g碳酸钠溶于100ml蒸馏水中。染色时直接吸入染色液覆盖菌落上1min左右，用生理盐水洗去染色液后，在低倍显微镜下可见支原体菌落成蓝色，其他细菌菌落不着色，容易鉴别。 
（2）毛地黄皂苷敏感性试验：用95%酒精配制1.5%毛地黄皂苷液，56℃水浴加热使完全溶解。然后将此溶液浸湿灭菌的小圆滤纸。37℃使干燥，置冰箱保存使用。将待检支原体菌液涂种于固体培养基上，再将上述毛地黄皂苷纸片放于接种培养基上，培养3—5d后，低倍镜下观察菌落生长情况。若有抑制带出现，带宽>2mm的为支原体，带宽<2mm为无甾醇原体。 
（3）生化反应试验：常利用发酵葡萄糖、水解精氨酸、水解尿素等生化反应鉴别支原体。 
                          表  人类支原体的生化反应 
支原体          是否需要    分解    水解       水解      还原      吸附 
                 胆固醇    葡萄糖   精氨酸     尿索     四氮唑    血细胞 
发酵支原体          +         +       +        —        —          — 
肺炎支原体          +         +       —        —       —          — 
溶脲脲原体          +         —      —         +       —         +
人型支原体          +         —       +        —       —        — 
生殖支原体          +         +       —        —       —         +
唾液支原体          +         —        +        —       —        —
口腔支原体          +         +        +         —       —        —
穿通支原体          +         +        +         —        —       + 
（4）血细胞吸附试验：在平板琼脂培养基上生长的支原体菌落滴上豚鼠红细胞悬液，人体的某些支原体有吸附作用。 
（5）生长抑制试验：用直径6—8mm的圆形灭菌滤纸片，用未经稀释的抗血清湿透后，放入无菌平板内，于4℃下干燥待用。吸取待检菌株的菌液0.5ml涂布于固体培养基上，放置37℃使琼脂表面稍干燥 。无菌操作夹取抗血清纸片贴于琼脂表面，37℃培养4—5d。在低倍镜下观察，当滤纸片周围无菌落生长，出现抑菌圈大于2mm者表示该菌与抗血清的免疫原同一菌种，小于2mm为异种。试验时应该设立阴性对照组和阳性对照组。