衣原体特异性抗原和抗体检测方法
2008-11-24 16:48:41 青岛海博生物
(3)细胞分离培养:可选用McCoy、HEla-229、FL、HL等对衣原体敏感的长成单层的细胞,载体可用玻璃小瓶或塑料培养板,在底部可预置适当大小的盖玻片。接种标本后,1800—3000g离心1h,促进EB进入细胞。吸附1h,吸去上清液,加入含放线菌酮0.5ug的1640维持液, 35℃CO2孵箱或密封培养,48—72h后取出盖玻片,漂洗、甲醇固定后,可作吉姆萨、碘液或单克隆抗体荧光抗体染色,高倍显微镜或荧光显微镜下观察包含体。必要时,亦可作盲目传1—3代。
细胞培养法的敏感性为80%—90%,特异性为100%,是目前诊断沙眼衣原体感染最可靠的方法,因此是评价其他实验室诊断方法的金标准。
(1)涂片检测:包括结膜涂片和宫颈拭子涂片,前者可用吉姆萨染色或单克隆抗体荧光抗体染色,寻找包含体;后者可用单克隆抗体荧光抗体染色寻找涂片中的RB(始体)或EB颗粒。此法敏感性较低,与细胞培养法比较,敏感性仅为70%—80%,特异性为80%。但此法在于简便易行。约需20min,但需有高质量的单克隆抗体和荧光显微镜,且观察人员必须有丰富的经验。
(2)ELISA检测衣原体抗原此法应用的主要是结膜刮片、尿道和宫颈拭子,时间需2—3h。一般报告其敏感性为62%—98%,特异性为92%—98%。有经验的实验室人员,诊断泌尿生殖道衣原体感染时,其敏感性为细胞培养的70%—80%。但经不断改进后的多家公司生产的诊断试剂,其敏感性已提高到85%—90%。
(3)快速诊断试剂:最近出现了一些快速诊断试剂,例如美国加利福尼亚州新传生物技术公司生产的CHLAMYGEN衣原体快速诊断试剂盒是一种酶反应检测系统,含有一合成底物,预置于特制的拭子上。用此拭子采集尿道或官颈的上皮细胞,滴加所附试剂A和B各2滴于拭子上,等待10min,再滴加2滴试剂C,1min内出现紫色者为阳性。全过程只需12min,确实快速 。与细胞培养法相比,其敏感性为97.2%,特异性为99.2%。但一些专家认为,目前的一些快速诊断试剂,还都存在着敏感性和特异性方面的问题。
(3)检测特异性抗体———微量免疫荧光检测法:Wang等创建的微量免疫荧光(MIF)技术,是检测衣原体抗体较好的方法。此项技术可作分离物的血清学分型,也可严格应用于血清流行病学的研究。它可给人们提供多方面有用的资料:临床致病谱和感染的后果,在不同人群中流行病学的分布。这是一种主观性较强的试验,因此观察者需要有丰富的实践经验。一般认为此法不适用于诊断衣原体的早期感染,且敏感性和特异性均不高。然此法作为流行病学调查,颇为简便。
用此法测定的型抗原是位于衣原体表面的表面抗原。可用强碱处理(pH12.5,37℃,1h),溶解于氯仿一 甲醇一水中,分层提取脂类 。该型抗原不会被1%胰酶、链霉蛋白酶或过碘酸盐所破坏,是与蛋白质结合的类脂半抗原。微量免疫荧光技术把沙眼衣原体共分为15个血清型:即A、B、Bb 、C、D、E、F、G、H、I、J、K和L1、L2、L3,前12型称为沙眼包含体结膜炎衣原体,后3型为淋巴肉芽肿衣原体。