出口食品中沙门氏菌（辛酯酶荧光）检验方法 SN 0332-94

2008-7-31 17:07:16 青岛海博生物

出口食品中沙门氏菌（辛酯酶荧光）检验方法 SN 0332-94
1 主题内容与适用范围
本标准规定了用 4-甲基伞形酮辛酯试剂快速检验出口食品中沙门氏菌的方法。
本标准适用于出口肉品、蛋品沙门氏菌的检验，其他食品可参照使用。
2 引用标准
SN 0170 出口食品中沙门氏菌（包括亚利桑那菌）检验方法
3 符号
MUCAP:4-methylumbelliferyl-caprylate（4-甲基伞形酮辛酯）的缩写。
MUCAP:试剂：用 4-甲基伞形酮辛酯配成的试剂的缩写。
SS琼脂：沙门氏菌和志贺氏菌琼脂培养基。
HE琼脂：Hektoen Enteric 琼脂培养基。
4 设备与材料
4.1 紫外光灯：波长 366 nm，功率≥6W。
4.2 放大镜：3～4X。
4.3 毛细滴管。
5 培养基与试剂
培养基与试剂按 SN 0170 第5章，另补充以下部分：
5.1 SS琼脂培养基（含1％蔗糖）：见附录 A1。
5.2 HE琼脂培养基：见附录 A2。
5.3 MUCAP试剂：见附录 A3。
5.4 氧化酶试纸：见附录 A4。
6 样品制备及增菌培养
参照SN 0170进行。
7 分离培养
7.1 将增菌培养液摇匀,挑取一接种环，划线接种于 SS和 HE琼脂培养基各一个，于 36
±1℃培养 24±2h。
7.2 观察各琼脂平板上有无可疑沙门氏菌菌落。如无可疑菌落，应再继续培养24±2h。
沙门氏菌的菌落特征见表 1。
表 1 沙门氏菌属菌落特征
──────────────────────────────────────
菌落特征
──────────────────┬───────────────────
SS平板 │ HE平板
──────────────────┼───────────────────
圆形,边缘整齐；淡黄色,半透明，有或无│圆形，边缘整齐；蓝绿色至蓝色，有或无黑
黑色中心；周围培养基透明淡黄色 │色中心；周围培养基透明墨绿色
──────────────────┴───────────────────
8 测定
8.1 从培养的分离培养基上选可疑沙门氏菌菌落（尽量选较大、分离较好的单个菌落），
用玻璃笔做好标记并编号。
8.2 用毛细滴管吸取 MUCAP试剂，加一滴于编号的菌落上。待一个平板的被检菌落全部
滴加试剂后，将平板拿至366nm紫外光灯下检视。发蓝色荧光的为 MUCAP试验阳性，将阳
性菌落号记录下来。
8.3 用接种环挑取荧光反应阳性菌落，涂于氧化酶试纸上，观察涂菌点是否变蓝色。于
10min内变蓝色为氧化酶试验阳性；不变色为阴性。
9 结果的报告
9.1 MUCAP试验阴性的样品，报告为“未检出沙门氏菌”
9.2 MUCAP试验阳性氧化酶试验阴性的样品，按SN 0170第四章继续进行生化和血清学试
验，并根据试验结果报告。
附录 A
培养基和试剂
（补充件）
A1 SS琼脂培养基（含1％蔗糖）
牛肉浸膏 5.0g
蛋白胨 5.0g
乳糖 10.0g
蔗糖 10.0g
胆盐No.3 8.5g
柠檬酸钠 8.5g
硫代硫酸钠 1.0g
柠檬酸亚铁 1.0g
煌绿 1.0g
中性红 0.025g
琼脂 13.5g
蒸馏水 1 000ml
将各成分溶于水，煮沸4～5min。最终pH7.0±0.2。冷至55～66°C，倾注平板。
A2 HE琼脂培养基
(月示)蛋白胨 12.0g
酵母浸出物 3.0g
乳糖 12.0g
蔗糖 12.0g
水杨素 2.0g
混合胆盐 9.0g
氯化钠 5.0g
硫代硫酸钠 5.0g
柠檬酸铁铵 1.5g
溴麝香草酚蓝 0.065g
酸性复红 0.1g
琼脂 14.0g
蒸馏水 1000mL
将各成分溶于水，煮沸4～5min。最终pH7.5±0.2。冷至55～60°C，倾注平板。
A3 MUCAP试剂
按生产者提供的使用说明制备工作稀释液，贮于4°C冰箱备用。
A4 氧化酶试纸
氧化酶试液：
甲液：1％α-萘酚乙醇液；
乙液：1％二甲基对苯二胺草酸盐水溶液。
氧化酶试纸：
将甲液与乙液等量混合。取定性滤纸，浸透混合液后，于70～80°C烘箱烘干。剪成
适当大小的纸条，密封于塑料袋或瓶中，贮于4°C冰箱备用。
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附加说明：
本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。
本标准由中华人民共和国内蒙古进出口商品检验局起草。
本标准主要起草人甄宏太、杨素贤、刘中学、苏庆、周云霞。
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中华人民共和国国家进出口商品检验局1994-12-26批准 1995-05-01实施