微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等,必须经灭菌后方能使用。
一、灭菌前准备
1、所有需经灭菌的物品首先要清洗晾干,玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密,如用金属筒应将上面气孔打开。
2、装培养基的三角瓶塞好棉塞,用纸包好,试管盖好盖,注射器须将管芯抽出,用纱布包好。
二、装放
1、大型高压蒸气锅:放置灭菌物品不应超过锅内容积的80%,物品应放置锅内搁架上或铁丝筐中。
2、手提式高压锅:将物品分别包扎好,直接放入消毒筒内,物品之间不能过挤。
三、设备检查
1、检查门的开关是否灵活,橡皮圈有无损坏,是否平整。
2、压力表蒸气排尽时是否停留在零位,关好门和盖,通蒸气或加热后,观察是否漏气,压力表与温度计所标示的状况是否吻合,管道有无堵塞。
3、对有自动电子程序控制装置的灭菌器,使用前应检查规定的程序,是否符合于进行灭菌处理的要求。
四、灭菌处理
手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行:
1、手提式高压锅在主体内加入3L清水,立式高压锅加水16L(重复使用时应将水量补足,水变混浊需要更换)。
2、手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中(无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用)。
3、盖好顶盖拧紧,勿使漏气;置灭菌器于火源上加热,立式压力锅通上电源,并打开顶盖上的排气阀放出冷气(水沸腾后排气10~15min)。
4、关闭排气阀,使蒸气压上升到规定要求,并维持规定时间(按灭菌物品性质与有关情况而定)。
5、达到规定时间后,对需干燥的物品,立即打开排气阀排出蒸汽,待压力恢复到零时,自然冷却至60℃后开盖取物,如为液体物品,不要打开排气阀,而应立即将锅去除热源,待自然冷却,压力恢复至零,温度降到60℃以下再打开盖取物,以防止突然减压液体剧烈沸腾活容器爆破。
五、灭菌温度与时间
压力蒸气灭菌锅灭菌温度与时间见下表:
物品 |
灭菌时间,min |
115℃ |
121℃ |
不含糖等耐热培养基 |
|
15 |
含糖类等耐热培养基 |
15-20 |
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染菌培养物 |
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30 |
器械器皿 |
|
30 |
六、灭菌处理
灭菌后物品,按正常情况已属无菌,从灭菌器中取出应仔细检查,以免再度污染。
1、物品取出,随即检查包装的完整性,若有破坏或棉塞脱掉,不可作为无菌物品使用。
2、取出的物品,如为包装有明显的水浸者,不可作为无菌物品使用。
3、培养基或试剂等,应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态,未达到者应废弃。
4、取出的物品掉落在地或误放不洁之处,或沾有水液,均视为受到污染,不可作为无菌物品使用。
5、取出的合格灭菌物品,应存放于贮藏室或防尘柜内,严禁与未灭菌物品混放。
6、凡属合格物品,应标有灭菌日期及有效期限。
7、每批灭菌处理完成后,记录灭菌品名、数量、温度、时间、操作者。