【摘要】 目的 探讨农药残留的快速检测方法 方法 采用快速测定方法—酶抑制法。 结果 通过对5 添加农药的蔬菜测定，其回收率 85%～105%，与气相色谱法的测定结果基本 致。结论 酶抑制法可以用于蔬菜中农药残留的快速测定。
【关键词】 农药残留;酶抑制法;气相色谱法;测定
目 我国有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的分析方法有气相色谱法、薄层色谱法以及快速测定方法—酶抑制法。气相色谱法虽是国家标准方法，但要求条件较高，必须具备气相色谱仪并配有火焰光度检测器(FPD)或氮磷检测器(NPD），有适合的色谱柱等，需要昂贵的仪器设备；薄层色谱法检测方法繁杂，操作难度较 ；酶抑制法虽然不是国标法，但具有检测快速、设备和试剂简单、成本低等特点，适合水果蔬菜上市前农药残留毒性的检测，受到基层疾病预防控制机构的普遍欢迎。
1 材料与方法
1.1 试剂配制 （1) pH8.0缓冲溶液：分别取11.9g无水磷酸氢二钾与362g磷酸二氢钾，用 1000ml蒸馏水溶解。(2)显色剂4g/L：分别取80mg二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和15.6 mg碳酸氢钠，用20ml缓冲溶液溶解，置于4℃冰箱中保存。(3)底物21.67g/L：取65mg硫代乙酰胆碱，加3.0ml蒸水溶解，摇匀后，置4℃冰箱中保存备用。(4)乙酰胆碱酯酶：3.0mg/L用缓冲溶液溶解，摇匀后，置4℃冰箱中保存备用。(5)有机磷标准储备液：将从国家农药质检中心购买的甲氨磷、敌百虫、乐果、克百威和灭 威饵品用丙酮配制成1g/L的溶液。标准使用液临用前配制。
1.2 使用仪器 CL-F2000残留农药测定仪(上海复淳软件科技发展有限公司)；气相色谱仪：上海天普分析仪器有限公司GC900A高性能气相色谱仪。
1.3 操作方法 每 样品做平行样，首先在试管中加入有机磷标液后，然后分别加入3.0ml缓冲液，50μl乙酰胆碱酯酶液，100μl显色剂，摇匀后，在37℃放置15min，加入40μl底物；在0.5min内混合均匀，30s后，立即用F2000测定仪进地测定，F2000型快速测定仪记录1min酶抑制率I%，CK为酶活性的大小。
计算公式：回收率(%)=（I%/I0）×100
式中I%—(菜 +标)提取后测定的抑制率减去菜的空白抑制率；
I0%—直接测定加入农药抑制率。
2 结果与讨论
2.1 条件选择
2.1.1 酶活性的测定 分别加入20、40、80μl酶，其他试剂为缓冲溶液3ml，显色剂100μl，底物20μl。测定结果可见，1、2、3 min的线性相似。但酶活性随着酶的 量增加而增加。随着时间的变化，酶的活性不断下降。因此，测定的时间应定为 1或 2 min之内。酶量较少时，灵敏度较低，但酶量大时，灵敏度虽高，但变化较快，使反应不稳定，故取中间值50μl的酶量较佳。
2.1.2 温度、时间、底物与条件的选择 在室温放置与水浴37℃放置酶的活性不同，37℃放置15和20min，酶的活性也不同。实验结果表明，温度过低与时间过长，酶的活性均较低；37℃放置15min反应，酶的活性较高。底物应足够量，否则，反应不够完全。故取40μl底物为佳。
2.2 标准曲线的测定 将 6种农药1g/L的丙酮标准储备液，用蒸馏水稀释为甲氨磷10mg/L，毒死蜱100mg/L，敌百虫0.1mg/L，乐果100mg/L，克百威1mg/L，灭多威10mg/L。抑制率：甲氨磷为84.55%，毒死蜱为98.45%，敌百虫为94.32 %，乐果为48.43 %，克百威为92.76 %，灭多威为88.85 %。克百威、敌百虫的相关系数可达到0.99，其他几种农药达到0.96～0.9，由此证明本方法可以作为筛选方法，确证还需要经过气相色谱法测定。
2.3 回收率 在蔬菜中添加农药，用快速测定仪测定，见表1。表1 回收率测定结果由此可见，蔬菜中加标的回收率为85%～105%，能满足实验要求。
2.4 精密度 按照2.3添加农药标准，用快速测定仪测定。由此可见精密度范围在0.9%～4.3%，满足实验要求。
2.5 样品测定结果 将加标样用快速检测方法和气相色谱法测定，样品取样量为10.0g。测定结果表明，两种方法测定结果基本一致。
3 结论
综上所述，可以得出快速测定法—酶抑制法能够可满足大批样品农药残留的筛选，但对于抑制率超过30%的样品，应及时进行气相色谱的分析，以进一步确定农药的种类和浓度。
4 注意问题
4.1 快速测定法时间 加入底物混匀30s后定时，1min后测定。并保证混匀过程时间一致，一般实验人员都可在30s内操作完毕。
4.2 温度和时间 酶抑制的温度和时间对酶的活性影响较大，应该严格控制。
4.3 气相色谱测定 如果有机磷或氨基甲基甲酸酯类品种增加，可适当增加色谱的柱长度。
作者：马爱霞《中华医药杂志》
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