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常用染色液的配制
2011-5-9 9:28:32 青岛海博
1.黑色素液 水溶性黑素10g,蒸馏水100mL, 甲醛(福尔马林)0.5mL。可用作荚膜的背景染色。
 
2.墨汁染色液  国产绘图墨汁40mL,甘油2mL,液体石炭酸2mL。先将墨汁用多层纱布过滤,加甘油混匀后,水浴加热,再加石炭酸搅匀,冷却后备用。用作荚膜的背景染色。
 
3.吕氏(Loeffier)美蓝染色液
A液:美蓝(methylene blue, 又名甲烯蓝)0.3g, 95%乙醇30mL;
B液:0.0l% KOH l00mL。
混合A液和B液即成,用于细菌单染色,可长期保存。根据需要可配制成稀释美蓝液,按1:10或1:100稀释均可。
 
4.革兰氏染色液
(1)结晶紫(crystal violet)液:结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL,1%草酸铵水溶液80mL 将两液混匀置24h后过滤即成。此液不易保存,如有沉淀出现,需重新配制。
(2)卢戈(Lugol)氏碘液:碘1g,碘化钾2g,蒸馏水300mL。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加蒸馏水至300mL即成。配成后贮于棕色瓶内备用,如变为浅黄色即不能使用。
(3)95%乙醇:用于脱色,脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。
(4)稀释石炭酸复红溶液:碱性复红乙醇饱和液(碱性复红1g, 95%乙醇l0mL, 5%石炭酸90mL混合溶解即成碱性复红乙醇饱和液),取石炭酸复红饱和液l0mL加蒸馏水90mL即成。
(5)番红溶液:番红O(safranine,又称沙黄O)2.5g, 95%乙醇100mL,溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中,用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。
以上染液配合使用,可区分出革兰氏染色阳性(G+)或阴性(G-)细菌,G-被染成蓝紫色,G+被染成淡红色
 
5. 鞭毛染色液
A液:丹宁酸5.0g, FeCl3 1.5g,15%甲醛(福尔马林)2.0mL,l%NaOH 1.0mL,蒸馏水l00mL;
B液:AgNO3 2.0g, 蒸馏水100mL。
待AgNO3溶解后,取出l0mL备用,向其余的90mLAgNO3中滴加NH4OH,即可形成很厚的沉淀,继续滴加NH4OH至沉淀刚刚溶解成为澄清溶液为止,再将备用的AgNO3慢慢滴入,则溶液出现薄雾,但轻轻摇动后,薄雾状的沉淀又消失,继续滴入AgNO3,直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止,如雾重,说明银盐沉淀出,不宜再用。通常在配制当天便用,次日效果欠佳,第3天则不能使用。
 
6. 0.5%沙黄(Safranine)液:2.5%沙黄乙醇液20mL,蒸馏水80mL。将2.5%沙黄乙醇液作为母液保存于不透气的棕色瓶中,使用时再稀释。
 
7. 5%孔雀绿水溶液:孔雀绿5.0g,蒸馏水100mL。
 
8. 0.05%碱性复红:碱性复红0.05g,95%乙醇100mL。
 
9.齐氏(Ziehl)石炭酸复红液:碱性复红0.3g溶于95%乙醇l0mL中为A液:0.01%KOH溶液l00mL为B液。混合A、B液即成。
 
10.姬姆萨(Giemsa)染液
(1)贮存液:称取姬姆萨粉0.5g,甘油33mL,甲醇33mL。先将姬姆萨粉研细,再逐滴加入甘油,继续研磨,最后加入甲醇,在56℃放置1~24h后即可使用。
(2)应用液(临用时配制):取1mL贮存液加19mL pH7.4磷酸缓冲液即成。亦可取贮存液:甲醇=1:4的比例配制成染色液。
 
11.乳酸石炭酸棉蓝染色液(用于真菌固定和染色)  石炭酸(结晶酚)20g,乳酸20mL,甘油40mL,棉蓝0.05g,蒸馏水20mL。将棉蓝溶于蒸馏水中,再加入其他成分,微加热使其溶解,冷却后用。滴少量染液于真菌涂片上,加上盖玻片即可观察。霉菌菌丝和孢子均可染成蓝色。染色后的标本可用树脂封固,能长期保存。
 
12. 1%瑞氏(Wright’s)染色液:称取瑞氏染色粉6g,放研钵内磨细,不断滴加甲醇(共600mL)并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用,保存时间愈入,则染色色泽愈佳。
 
13.阿氏(Albert) 异染粒染色液:
A液:甲苯胺蓝(toluidine blue)0.15g,孔雀绿0.2g,冰醋酸lmL,95%乙醇2mL,蒸馏水100mL;
B液:碘2g, 碘化钾3g,蒸馏水300ml。
先用A液染色1min,倾去A液后,用B液冲去A液,并染1min。异染粒呈黑色,其他部分为暗绿或浅绿。
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