一、标本采集
支原体常侵及人和动物的粘膜表面，一般可用棉花拭子涂抹取样后放入2~3ml支原体液体培养基的小管中，或取其分泌液，若标本是组织块，可在灭菌乳钵或玻璃匀浆后接种，取样后应尽快接种培养。
二、分离培养
1、支原体固体培养基接种法转动拭子将标本液体尽量挤出，用无菌滴管吸1~2滴接种在平皿上盖好，用L棒涂抹或倾斜转动平皿使标本均匀分布，置37℃孵育。
2、支原体半固体培养基接种法混种法：在制备半固体培养基时，培养基加热溶化，温度降至50℃时，添加动物血清、酵母浸液及青霉素后混匀，待冷却至37~40℃时，用无菌滴管吸取标本 0.5~1ml加入培养基中，充分混匀，凝固后置37℃孵育。
3、穿刺接种法：方法同细菌接种法。
三、结果观察
绝大多数支原体为兼性厌氧，少数在含10% CO2和相对湿度80~90%的大气环境中生长良好。支原体生长缓慢，多数于3~4d长出菌落，少数于1~2w方长出典型菌落，在平皿固体培养基上生长的菌落呈"油煎蛋"状，边缘不整齐。
四、附录
糖酵解培养基（肺炎支原体培养基）
基础培养基 70ml
马（或牛血清） 20ml
25%酵母浸液 10ml
0.4%酚红 0.5ml
1%醋酸铊 2.5ml
青霉素10000IU/ml 5.0ml
调pH 7.8
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